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汕头大学海洋科学接受调剂
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lwyliuying

新虫 (初入文坛)

[交流] ECORI酶切切不开总基因组

最近做AFLP,发现单独用ECORI酶切基因组时,20小时都没什么反应,一条主带,下面没有弥散。由于ECORI酶切位点为低频酶切位点,不知道是不是因为这个原因切不开总基因组。我用的两中ECORi酶(fermentas,takara)进行单酶切均切不开,并且基因组我也借用过动物的也是切不开,不知道问题出在哪。怀疑酶有问题,但这两公司酶都是可以的。但是用MSEI酶切很快就能切开。请教大家这到底是为什么。BUFFER用量严格按照说明来用的。
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yfsuperuser

木虫 (正式写手)

同问。急!!!!
2楼2009-06-16 11:18:55
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
比较奇怪啊,无法解答,帮顶。同样想知道
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
3楼2009-06-16 18:28:18
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dyyyyy

铁杆木虫 (著名写手)

可能与dna纯度有关,建议你用试剂盒提取dna试试
4楼2009-06-16 18:51:38
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playboy723

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
呵呵 不是  应该是基因组甲基化的缘故吧  你查查酶的说明上看有没有说明这点
5楼2009-06-16 19:59:08
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jeck.li

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你到其他实验室或别人借个酶试试看。有时候确实是酶的问题,尤其是公用的。
也可能是你的基因组的浓度太大了,切不动。你也可以做个梯度试试。
6楼2009-06-16 23:06:06
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2008116068

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
可能是浓度太大了,切不动,稀释一下或同楼上所说,做梯度
只要踮起脚尖,就离太阳更近一点!!!
7楼2009-06-16 23:08:21
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飞侠8683

新虫 (小有名气)

用EcoRV切一下试试
8楼2009-06-18 09:15:25
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greatsaint

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我也想用EcoRI酶切基因组DNA,按你这么说也可能没效果啊。
9楼2009-06-18 09:50:32
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whlk2000

金虫 (小有名气)

我也想问
10楼2009-06-18 09:59:10
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