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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » ECORI酶切切不开总基因组
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lwyliuying

新虫 (初入文坛)

[交流] ECORI酶切切不开总基因组

最近做AFLP，发现单独用ECORI酶切基因组时，20小时都没什么反应，一条主带，下面没有弥散。由于ECORI酶切位点为低频酶切位点，不知道是不是因为这个原因切不开总基因组。我用的两中ECORi酶（fermentas,takara)进行单酶切均切不开，并且基因组我也借用过动物的也是切不开，不知道问题出在哪。怀疑酶有问题，但这两公司酶都是可以的。但是用MSEI酶切很快就能切开。请教大家这到底是为什么。BUFFER用量严格按照说明来用的。
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1楼 2009-01-08 19:22:09
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yfsuperuser

木虫 (正式写手)
同问。急！！！！
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2楼2009-06-16 11:18:55
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
比较奇怪啊，无法解答，帮顶。同样想知道
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
3楼2009-06-16 18:28:18
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dyyyyy

铁杆木虫 (著名写手)
可能与dna纯度有关，建议你用试剂盒提取dna试试
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4楼2009-06-16 18:51:38
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playboy723

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
呵呵 不是  应该是基因组甲基化的缘故吧  你查查酶的说明上看有没有说明这点
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5楼2009-06-16 19:59:08
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jeck.li

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你到其他实验室或别人借个酶试试看。有时候确实是酶的问题，尤其是公用的。
也可能是你的基因组的浓度太大了，切不动。你也可以做个梯度试试。
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6楼2009-06-16 23:06:06
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2008116068

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
可能是浓度太大了，切不动，稀释一下或同楼上所说，做梯度
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只要踮起脚尖，就离太阳更近一点！！！
7楼2009-06-16 23:08:21
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飞侠8683

新虫 (小有名气)
用EcoRV切一下试试
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8楼2009-06-18 09:15:25
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greatsaint

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我也想用EcoRI酶切基因组DNA，按你这么说也可能没效果啊。
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9楼2009-06-18 09:50:32
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whlk2000

金虫 (小有名气)
我也想问
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10楼2009-06-18 09:59:10
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