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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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bravexu

金虫 (小有名气)

[交流] RNA提取

最近用生工的RNA提取试剂盒提取水稻籽粒中的RNA。按照生工的说明书进行操作。在加入0.1ml氯仿/异戊醇后,按照说明书用12000rpm离心5min,管中层见白色絮状沉淀,上清的量很少或没有(protalk上说大约有0.45ml上清,但我提的时候一般只有0.1ml左右的上清),继续按照protalk上的步骤做下去,RNA的浓度很低或者没有。请问哪位高手能给我指点一下,谢谢了!
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ahhflhz

金虫 (小有名气)


bravexu(金币+1,VIP+0):谢谢
同上 建议使用传统方法.
淘宝女装店http://shop68644608.taobao.com/,欢迎光临!
6楼2009-01-09 16:05:30
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小小木虫8580

金虫 (小有名气)


bravexu(金币+1,VIP+0):谢谢
估计是水稻籽粒的多糖含量太高吧,
在提取液中加入 0.35 倍体积的无水乙醇,迅速混匀,多糖会先沉淀。
也可用缓冲液:100 mmol/LTris -HCl(pH=8.0)、5 mmol/L EDTA和0.35 mol/L Sorbitol洗几次。
也可能是蛋白过多,先用蛋白酶硝化一下再用氯仿/异戊醇抽提
2楼2009-01-08 16:26:43
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daixin8121


bravexu(金币+1,VIP+0):谢谢
应该是蛋白质含量较高,先加缓冲液粗提以后,在加蛋白酶K和DTT在42度下100r/m温和摇床1个半小时
3楼2009-01-08 19:25:07
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader


bravexu(金币+1,VIP+0):谢谢
奉劝你还是不要用试剂盒了,成本低,售价高,有的还骗人,用传统的方法做就可以了。种子的蛋白和多糖杂质比较多,可以用无水乙醇浸泡液氮研磨的种子,低温保存24小时,然后离心去上清,可以去掉多糖杂质。
会当凌绝顶,一览众山小
4楼2009-01-08 23:44:03
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