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leituoyuhua

新虫 (小有名气)

[求助] CRISPR cas9载体转化后是bar抗性，为什么在农杆菌侵染后愈伤组织要用潮霉素B筛选呢？ 已有3人参与

CRISPR cas9载体转化后是bar抗性，为什么在农杆菌侵染后愈伤组织要用潮霉素B筛选呢？是因为cas9酶自带潮霉素抗性吗？
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女生读研究生真累！！！
1楼 2017-05-11 22:32:45
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我欲乘风归去

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by leituoyuhua at 2017-05-12 18:09:02
对啊，LB和RB之间是basta抗性，但是我们这里有的实验室筛选用潮霉素B，听一个师姐说CAS9酶自带潮霉素B抗性，所以用潮霉素B筛选也行，但是不放心，想确认一下！...

那你得去看质粒图谱和序列。
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。
4楼2017-05-12 19:34:35
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我欲乘风归去

木虫 (正式写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-12 21:37:02
转化是把整个质粒转入宿主，质粒有什么抗性都可以用来做筛选。

侵染不是把整个质粒转入宿主DNA，只会把质粒的LB和RB之间的区域转入宿主基因组，LB和RB之间有什么抗性就用什么抗性筛选。
赞一下(2人) 回复此楼
。
2楼2017-05-12 17:25:26
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leituoyuhua

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 我欲乘风归去 at 2017-05-12 17:25:26
转化是把整个质粒转入宿主，质粒有什么抗性都可以用来做筛选。

侵染不是把整个质粒转入宿主DNA，只会把质粒的LB和RB之间的区域转入宿主基因组，LB和RB之间有什么抗性就用什么抗性筛选。

对啊，LB和RB之间是basta抗性，但是我们这里有的实验室筛选用潮霉素B，听一个师姐说CAS9酶自带潮霉素B抗性，所以用潮霉素B筛选也行，但是不放心，想确认一下！
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女生读研究生真累！！！
3楼2017-05-12 18:09:02
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-12 21:37:17
我不觉得cas9自带抗性，从来没听说过。没有hygro抗性基因就不用hygro。你再检查一下质粒。

发自小木虫IOS客户端
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Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
5楼2017-05-12 20:02:12
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查看全部 9 个回答
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