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汕头大学海洋科学接受调剂
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leituoyuhua

新虫 (小有名气)

[求助] CRISPR cas9载体转化后是bar抗性,为什么在农杆菌侵染后愈伤组织要用潮霉素B筛选呢? 已有3人参与

CRISPR cas9载体转化后是bar抗性,为什么在农杆菌侵染后愈伤组织要用潮霉素B筛选呢?是因为cas9酶自带潮霉素抗性吗?
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女生读研究生真累!!!
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我欲乘风归去

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by leituoyuhua at 2017-05-12 18:09:02
对啊,LB和RB之间是basta抗性,但是我们这里有的实验室筛选用潮霉素B,听一个师姐说CAS9酶自带潮霉素B抗性,所以用潮霉素B筛选也行,但是不放心,想确认一下!...

那你得去看质粒图谱和序列。
4楼2017-05-12 19:34:35
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我欲乘风归去

木虫 (正式写手)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-12 21:37:02
转化是把整个质粒转入宿主,质粒有什么抗性都可以用来做筛选。

侵染不是把整个质粒转入宿主DNA,只会把质粒的LB和RB之间的区域转入宿主基因组,LB和RB之间有什么抗性就用什么抗性筛选。
2楼2017-05-12 17:25:26
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leituoyuhua

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 我欲乘风归去 at 2017-05-12 17:25:26
转化是把整个质粒转入宿主,质粒有什么抗性都可以用来做筛选。

侵染不是把整个质粒转入宿主DNA,只会把质粒的LB和RB之间的区域转入宿主基因组,LB和RB之间有什么抗性就用什么抗性筛选。

对啊,LB和RB之间是basta抗性,但是我们这里有的实验室筛选用潮霉素B,听一个师姐说CAS9酶自带潮霉素B抗性,所以用潮霉素B筛选也行,但是不放心,想确认一下!
女生读研究生真累!!!
3楼2017-05-12 18:09:02
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-12 21:37:17
我不觉得cas9自带抗性,从来没听说过。没有hygro抗性基因就不用hygro。你再检查一下质粒。

发自小木虫IOS客户端
Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
5楼2017-05-12 20:02:12
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