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leituoyuhua

新虫 (小有名气)

[求助] CRISPR cas9载体转化后是bar抗性，为什么在农杆菌侵染后愈伤组织要用潮霉素B筛选呢？ 已有3人参与

CRISPR cas9载体转化后是bar抗性，为什么在农杆菌侵染后愈伤组织要用潮霉素B筛选呢？是因为cas9酶自带潮霉素抗性吗？
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女生读研究生真累！！！
1楼 2017-05-11 22:32:45
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我欲乘风归去

木虫 (正式写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-12 21:37:02
转化是把整个质粒转入宿主，质粒有什么抗性都可以用来做筛选。

侵染不是把整个质粒转入宿主DNA，只会把质粒的LB和RB之间的区域转入宿主基因组，LB和RB之间有什么抗性就用什么抗性筛选。
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。
2楼2017-05-12 17:25:26
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leituoyuhua

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 我欲乘风归去 at 2017-05-12 17:25:26
转化是把整个质粒转入宿主，质粒有什么抗性都可以用来做筛选。

侵染不是把整个质粒转入宿主DNA，只会把质粒的LB和RB之间的区域转入宿主基因组，LB和RB之间有什么抗性就用什么抗性筛选。

对啊，LB和RB之间是basta抗性，但是我们这里有的实验室筛选用潮霉素B，听一个师姐说CAS9酶自带潮霉素B抗性，所以用潮霉素B筛选也行，但是不放心，想确认一下！
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女生读研究生真累！！！
3楼2017-05-12 18:09:02
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我欲乘风归去

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by leituoyuhua at 2017-05-12 18:09:02
对啊，LB和RB之间是basta抗性，但是我们这里有的实验室筛选用潮霉素B，听一个师姐说CAS9酶自带潮霉素B抗性，所以用潮霉素B筛选也行，但是不放心，想确认一下！...

那你得去看质粒图谱和序列。
赞一下(1人) 回复此楼
。
4楼2017-05-12 19:34:35
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-12 21:37:17
我不觉得cas9自带抗性，从来没听说过。没有hygro抗性基因就不用hygro。你再检查一下质粒。

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Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
5楼2017-05-12 20:02:12
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
leituoyuhua: 金币+2, ★★★很有帮助 2017-05-15 08:30:02
另外bar抗基因不适合组培，最好换成hygro

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Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
6楼2017-05-12 20:03:19
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547star

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
leituoyuhua: 金币+2, ★★★很有帮助 2017-05-15 08:29:49
bar和潮霉素的抗性基因，都常用于筛选，会不会你们的质粒有2种，你只知道其中一种。不然，就是你师姐错了。当然，也不排除，转入CAS9后，编辑得到的是潮霉素抗性显性的（假如原来设计没有编辑时是隐性不形成潮霉素抗性）。
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为什么
7楼2017-05-12 23:53:54
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伤何处

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
leituoyuhua: 金币+2, ★有帮助 2017-05-15 08:29:36
一般会有两个抗性，一个是在菌里面表达的，一个是LB-RB之间转入植物里表达的。你最好再仔细看下载体图谱。
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对也罢，错也罢；正也罢，逆也罢；通途也好，崎岖无妨……但问，吾心坚否？若坚，纵使歧路，以铁心，贯穿而过，亦为大道！不坚，便是坦途，也难登临绝顶，观险峰
8楼2017-05-13 01:14:59
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原野漫漫

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
9楼2017-05-13 02:53:37
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