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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 为啥我做WB总是做不出条带呢
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18763893761

新虫 (初入文坛)

[交流] 为啥我做WB总是做不出条带呢 已有5人参与

做了好多好多次啦。刚开始还能看到条带，后期就看不到了只能看到Marker,同一批样。后面几次连内参都看不到了，不知道为什么。如果是转膜没转上怎么验证呀。

为啥我做WB总是做不出条带呢
IMG20170505123049.jpg


为啥我做WB总是做不出条带呢-1
IMG20170505124417.jpg
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1楼 2017-05-08 14:00:55
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糖糖糖糖1234

新虫 (初入文坛)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
同学，你用什么仪器拍的膜？我这边是拍到目的蛋白，但是Marker看不见

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2楼2017-05-09 13:38:50
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w1t2fg1

铜虫 (小有名气)
★
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不知道你是怎么转膜的，我是湿转100V 1个半小时，一般100KD以内蛋白都没问题。没有条带的问题我也出现过，但我是因为二抗用错了，山羊的让我用成兔的了。至于怎么鉴定转膜成功与否没做过。还有就是注意你有没有转反了。
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3楼2017-05-09 17:48:55
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w1t2fg1

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 糖糖糖糖1234 at 2017-05-09 13:38:50
同学，你用什么仪器拍的膜？我这边是拍到目的蛋白，但是Marker看不见

跟仪器没关系，有两种marker，一种是肉眼可见但不可曝光的，还有一种是只有曝光才能看的见得。
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4楼2017-05-09 17:50:48
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糖糖糖糖1234

新虫 (初入文坛)
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4楼: Originally posted by w1t2fg1 at 2017-05-09 17:50:48
跟仪器没关系，有两种marker，一种是肉眼可见但不可曝光的，还有一种是只有曝光才能看的见得。...

这种曝光可见的Marker用的多么？哪个用的比较普遍

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5楼2017-05-14 21:03:17
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zhen022

新虫 (正式写手)
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重新配制各类溶液试剂，而且不要图便宜，至少也得biorad公司才行

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6楼2017-05-15 08:16:50
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w1t2fg1

铜虫 (小有名气)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by 糖糖糖糖1234 at 2017-05-14 21:03:17
这种曝光可见的Marker用的多么？哪个用的比较普遍
...

这种western用的marker有很多种，就我所知的很多实验室用的都不一样。我用的啥牌子忘了，一次用个几微升就好，我一般3-5ul，没有太固定的要求，太多了反而会遮盖本身信号。
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7楼2017-05-15 10:11:29
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冰释蓝

新虫 (小有名气)
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2楼: Originally posted by 糖糖糖糖1234 at 2017-05-09 13:38:50
同学，你用什么仪器拍的膜？我这边是拍到目的蛋白，但是Marker看不见

maker曝光就是看不到的，正常

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8楼2017-05-15 13:47:19
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小角色大用途

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
转完膜后用丽春红染色看看，有条带说明转上了，没条带就没了。。。。
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9楼2017-05-30 15:22:58
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