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新虫 (初入文坛)

[交流] 为啥我做WB总是做不出条带呢 已有5人参与

做了好多好多次啦。刚开始还能看到条带,后期就看不到了只能看到Marker,同一批样。后面几次连内参都看不到了,不知道为什么。如果是转膜没转上怎么验证呀。

为啥我做WB总是做不出条带呢
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为啥我做WB总是做不出条带呢-1
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糖糖糖糖1234

新虫 (初入文坛)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
同学,你用什么仪器拍的膜?我这边是拍到目的蛋白,但是Marker看不见

发自小木虫Android客户端
2楼2017-05-09 13:38:50
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w1t2fg1

铜虫 (小有名气)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
不知道你是怎么转膜的,我是湿转100V 1个半小时,一般100KD以内蛋白都没问题。没有条带的问题我也出现过,但我是因为二抗用错了,山羊的让我用成兔的了。至于怎么鉴定转膜成功与否没做过。还有就是注意你有没有转反了。
3楼2017-05-09 17:48:55
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w1t2fg1

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 糖糖糖糖1234 at 2017-05-09 13:38:50
同学,你用什么仪器拍的膜?我这边是拍到目的蛋白,但是Marker看不见

跟仪器没关系,有两种marker,一种是肉眼可见但不可曝光的,还有一种是只有曝光才能看的见得。
4楼2017-05-09 17:50:48
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糖糖糖糖1234

新虫 (初入文坛)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by w1t2fg1 at 2017-05-09 17:50:48
跟仪器没关系,有两种marker,一种是肉眼可见但不可曝光的,还有一种是只有曝光才能看的见得。...

这种曝光可见的Marker用的多么?哪个用的比较普遍

发自小木虫Android客户端
5楼2017-05-14 21:03:17
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zhen022

新虫 (正式写手)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
重新配制各类溶液试剂,而且不要图便宜,至少也得biorad公司才行

发自小木虫Android客户端
6楼2017-05-15 08:16:50
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w1t2fg1

铜虫 (小有名气)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by 糖糖糖糖1234 at 2017-05-14 21:03:17
这种曝光可见的Marker用的多么?哪个用的比较普遍
...

这种western用的marker有很多种,就我所知的很多实验室用的都不一样。我用的啥牌子忘了,一次用个几微升就好,我一般3-5ul,没有太固定的要求,太多了反而会遮盖本身信号。
7楼2017-05-15 10:11:29
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冰释蓝

新虫 (小有名气)

★
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引用回帖:
2楼: Originally posted by 糖糖糖糖1234 at 2017-05-09 13:38:50
同学,你用什么仪器拍的膜?我这边是拍到目的蛋白,但是Marker看不见

maker曝光就是看不到的,正常

发自小木虫Android客户端
8楼2017-05-15 13:47:19
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小角色大用途

新虫 (正式写手)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
转完膜后用丽春红染色看看,有条带说明转上了,没条带就没了。。。。
9楼2017-05-30 15:22:58
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