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南方科技大学公共卫生及应急管理学院2025级博士研究生招生报考通知
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凌霄冻

金虫 (小有名气)

[求助] 质粒(双酶切条带正常)转染BL21(DE3)

请教,我的载体pet28a连接目的片段后,转入DH5a中菌落正常生长,提取质粒(双酶切条带正常)转染BL21(DE3)划平板(卡拉平皿),过夜培养不生长?
    我的操作  100ul感受态加10ul质粒,冰上30min,热激90秒,冰浴3min,加无抗LB900ul,37度180rmp摇1小时,200ul涂板(含卡拉25ug/ml).37度过夜,无菌落。请大神赐教。
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Zhibao1994

新虫 (小有名气)

不急,等等看。我做的也是这样第三天才给长出来

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2楼2017-05-15 10:59:48
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Zhibao1994

新虫 (小有名气)

质粒是不是有点儿多了呢?我热击是42度45秒,冰浴2分钟

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3楼2017-05-15 11:01:34
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Zhibao1994

新虫 (小有名气)

另外是不是可能涂板时没有菌呢?

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4楼2017-05-15 11:02:10
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Zhibao1994

新虫 (小有名气)

我操作时,第一次失败可能就是因为没有菌,建议如果菌少先4000离心5分钟再涂板

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5楼2017-05-15 11:03:40
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峰子大牛

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Zhibao1994 at 2017-05-15 10:59:48
不急,等等看。我做的也是这样第三天才给长出来

第三天张出来了吗

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6楼2018-06-20 09:44:50
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