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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 网络生活区 » 有奖问答 » 学术帮助 » 质粒（双酶切条带正常）转染BL21(DE3）
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凌霄冻

金虫 (小有名气)

[求助] 质粒（双酶切条带正常）转染BL21(DE3）

请教，我的载体pet28a连接目的片段后，转入DH5a中菌落正常生长，提取质粒（双酶切条带正常）转染BL21(DE3)划平板（卡拉平皿），过夜培养不生长？
    我的操作  100ul感受态加10ul质粒，冰上30min，热激90秒，冰浴3min，加无抗LB900ul,37度180rmp摇1小时，200ul涂板(含卡拉25ug/ml).37度过夜，无菌落。请大神赐教。
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1楼 2017-05-05 10:40:04
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Zhibao1994

新虫 (小有名气)
不急，等等看。我做的也是这样第三天才给长出来

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2楼2017-05-15 10:59:48
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Zhibao1994

新虫 (小有名气)
质粒是不是有点儿多了呢？我热击是42度45秒，冰浴2分钟

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3楼2017-05-15 11:01:34
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Zhibao1994

新虫 (小有名气)
另外是不是可能涂板时没有菌呢？

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4楼2017-05-15 11:02:10
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Zhibao1994

新虫 (小有名气)
我操作时，第一次失败可能就是因为没有菌，建议如果菌少先4000离心5分钟再涂板

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5楼2017-05-15 11:03:40
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峰子大牛

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Zhibao1994 at 2017-05-15 10:59:48
不急，等等看。我做的也是这样第三天才给长出来

第三天张出来了吗

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6楼2018-06-20 09:44:50
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