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西城_墨

金虫 (小有名气)

[求助] 已知引物如何知道它的条件呀! 已有4人参与

从论文中找到引物但是没有条件,怎么知道这个引物相应的条件呀!引物是
FDNE
5-GGGAATTCCATATGTTGAAACACGTCGCCGCTGCC-3
RDXE 5-
CGGAATTCCTCGAGCTGCCCGGCGCAGCTGTCGTCCTTG-3

@hc-material @gyesang 发自小木虫Android客户端
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
啥条件?不就是Tm值吗?有可能找师兄。
2楼2017-05-03 21:17:53
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
有很多在线或线下引物分析软件,随便选一个用即可
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
3楼2017-05-03 23:24:01
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西城_墨

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2017-05-03 21:17:53
啥条件?不就是Tm值吗?有可能找师兄。

就是tm值!用做PCR的条件!不知道用什么方式能找!

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4楼2017-05-04 11:03:40
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西城_墨

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by starseacow at 2017-05-03 23:24:01
有很多在线或线下引物分析软件,随便选一个用即可

用过premier 5.0没弄出来!能不能请你帮我弄一下!

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5楼2017-05-04 11:05:11
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 西城_墨 at 2017-05-04 11:03:40
就是tm值!用做PCR的条件!不知道用什么方式能找!
...

Tm = 71.6
Tm = 78.4
一定有几个碱基是模板上没有的,实际Tm较低。
6楼2017-05-04 11:11:00
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西城_墨

金虫 (小有名气)

非常感谢,两个引物的共同条件是取平均值吗?要做PCR的话,软件上面有没有PCR的循环条件呀!比如多少度变性多少时间!软件上能够查到吗! @starseacow

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7楼2017-05-04 11:24:45
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8楼2017-05-04 11:44:49
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Real000Lee

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
PCR反应体系及条件通常在你买taq酶的说明书上是有的,因为他要介绍酶的最适工作参数
给你个参考,我们用的95度变性,你那个Tm是退火,72度延伸(1000—2000bp/min),4度保存,30~35个循环
根据我的经验通常退火温度低一点容易扩出条带但特异性偏低,高的话正好相反,大批量实验前最好先做个梯度摸清条件

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

9楼2017-05-06 11:23:40
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西城_墨

金虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
9楼: Originally posted by Real000Lee at 2017-05-06 11:23:40
PCR反应体系及条件通常在你买taq酶的说明书上是有的,因为他要介绍酶的最适工作参数
给你个参考,我们用的95度变性,你那个Tm是退火,72度延伸(1000—2000bp/min),4度保存,30~35个循环
根据我的经验通常退火温 ...

非常感谢!!

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10楼2017-05-08 13:50:49
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