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氺泽兮木兰

新虫 (初入文坛)

[求助] IPTG诱导BL21表达外源蛋白

菌株为BL21,用于外源蛋白表达,载体为pET28a。摇瓶37℃培养,在od为0.6时进行不同IPTG浓度诱导,但是全菌电泳结果没有任何差别,大神们知道为什么吗?应该怎样改进呢

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恒河的微笑

新虫 (初入文坛)

都没有诱导出来?还是表达量差别不大,如果差别不大的话可能IPTG浓度影响不大,一般来说都用0.5mM,如果没诱导出来建议多挑取几个单克隆先用0.5mM IPTG诱导,选择一个能诱导出来的,或者也可以考虑低温过夜诱导

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2楼2017-04-27 13:14:44
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璐璐sunny

铁杆木虫 (正式写手)

你说的全菌电泳是什么意思,如果是取等量培养完的培养液跑的电泳那应该没有意义,因为由于诱导剂浓度不一样导致最终诱导完的菌的浓度也不一样,你要么稀释成相同的OD600再跑电泳,要么测粗酶酶活。

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3楼2017-04-27 14:02:58
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氺泽兮木兰

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 恒河的微笑 at 2017-04-27 13:14:44
都没有诱导出来?还是表达量差别不大,如果差别不大的话可能IPTG浓度影响不大,一般来说都用0.5mM,如果没诱导出来建议多挑取几个单克隆先用0.5mM IPTG诱导,选择一个能诱导出来的,或者也可以考虑低温过夜诱导
...

表达量差别不大。有这种可能吗?IPTG添加与否表达量都不变,我加了IPTG后菌体量还变小了,那我是否可以不加IPTG诱导呢?

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4楼2017-04-27 14:36:10
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氺泽兮木兰

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by 璐璐sunny at 2017-04-27 14:02:58
你说的全菌电泳是什么意思,如果是取等量培养完的培养液跑的电泳那应该没有意义,因为由于诱导剂浓度不一样导致最终诱导完的菌的浓度也不一样,你要么稀释成相同的OD600再跑电泳,要么测粗酶酶活。
...

我一般是取等量培养基,这样确实和菌量有关系,稀释为等量od,这样的电泳图的蛋白量对比才有意义是吗?

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5楼2017-04-27 14:39:53
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