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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 质粒转化
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18270879372

新虫 (小有名气)

[求助] 质粒转化 已有3人参与

克隆菌株转化没有问题 但是表达菌株在转化时就一直不长菌，也试了其他几家的BL21 但是都没有长 质粒送去测序 结果显示正常 以前师姐也做过 没有问题   这次师姐也没做出来   求助哪位大神能给指条路。。。。 @youlinglyw
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1楼 2017-04-25 15:14:32
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贱贱JMe

木虫 (小有名气)

教导主任

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
18270879372(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-04-27 14:34:40
质粒没有问题但是长不出来。要么就是感受态的问题，要么就是培养基的问题。不管用哪种转化方法，按照说明书操作就可以。可以从以上两方面找原因。
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想做一位科研好人
2楼2017-04-25 15:20:20
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xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)
质粒转DH5a后再提取，重转一下，感受态可以试试全式金公司的，抗性选择对了吗？

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3楼2017-04-25 15:38:46
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普通回帖

18270879372

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by xinxiyuzhou at 2017-04-25 15:38:46
质粒转DH5a后再提取，重转一下，感受态可以试试全式金公司的，抗性选择对了吗？

我提了TOP10的质粒 重新转 还是没有长
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4楼2017-04-25 15:57:11
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18270879372

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 贱贱JMe at 2017-04-25 15:20:20
质粒没有问题但是长不出来。要么就是感受态的问题，要么就是培养基的问题。不管用哪种转化方法，按照说明书操作就可以。可以从以上两方面找原因。

谢谢您 但是我还想问下 就是我换了几家公司的菌 都没有长 而top10 和DH5阿发 都长了
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5楼2017-04-25 16:00:32
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18270879372

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by xinxiyuzhou at 2017-04-25 15:38:46
质粒转DH5a后再提取，重转一下，感受态可以试试全式金公司的，抗性选择对了吗？

谢谢您的建议
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6楼2017-04-25 16:01:52
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18270879372

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 18270879372 at 2017-04-25 16:00:32
谢谢您 但是我还想问下 就是我换了几家公司的菌 都没有长 而top10 和DH5阿发 都长了...

还可能是培养基的问题么？ 做表达菌株的转化有木有比较特别要注意的点？
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7楼2017-04-25 16:10:22
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西西sm

新虫 (正式写手)
我质粒酶切都出问题了，跑胶的片段都不对，怎么办

发自小木虫IOS客户端
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8楼2017-04-25 17:50:28
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冰之雪域

新虫 (小有名气)
★
18270879372(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-04-27 14:35:27
难道你的目的蛋白是某种酶，转化到bl21中后自己泄露表达，对菌体本身来说会发生制死效果

发自小木虫IOS客户端
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9楼2017-04-25 18:06:28
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18270879372

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 冰之雪域 at 2017-04-25 18:06:28
难道你的目的蛋白是某种酶，转化到bl21中后自己泄露表达，对菌体本身来说会发生制死效果

谢谢你的回复，目的蛋白应该没有问题 因为师姐在去年还纯化过该蛋白，也是的相同的菌株，所以该可能性不是很大。
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10楼2017-04-26 08:48:12
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