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草溪河

铁虫 (著名写手)

主要还是引物特异性吧。如果是克隆某个片段,只要有你的目的条带就行,切下回收测序条带正确就行,不一定非得是单一条带。但是如果是检测或者其他用途除外,主要是看具体目的。

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11楼2017-04-26 15:32:47
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匿名

用户注销 (正式写手)

本帖仅楼主可见
12楼2017-04-26 17:44:02
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zhoubin0823

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1、优化pcr条件,比如更高的退火温度,不过大多数情况下无用。
2、这种情况,一般问题出在引物上,重新设计引物,引物好自然条带单一。
3、最想推荐的方法,看胶上还是有1600bp的条带,割胶回收,取回收产物再pcr,可以肯定再次p,条带单一。KOD酶保真性非常好,p过几次2500bp无突变,用它pcr两次引入突变的概率不大。
13楼2017-04-27 09:02:20
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lusandanooo

银虫 (小有名气)

没事啊,只要有片段就行了,想特异性好可以提高退火温度,或者做胶回收然后以胶回收产物为模板再P。

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毕了业真开心嘻嘻嘻嘻嘻
14楼2017-04-27 11:51:12
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