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草溪河

铁虫 (著名写手)

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主要还是引物特异性吧。如果是克隆某个片段，只要有你的目的条带就行，切下回收测序条带正确就行，不一定非得是单一条带。但是如果是检测或者其他用途除外，主要是看具体目的。

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11楼2017-04-26 15:32:47

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匿名

用户注销 (正式写手)

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12楼2017-04-26 17:44:02

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zhoubin0823

木虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

1、优化pcr条件，比如更高的退火温度，不过大多数情况下无用。
2、这种情况，一般问题出在引物上，重新设计引物，引物好自然条带单一。
3、最想推荐的方法，看胶上还是有1600bp的条带，割胶回收，取回收产物再pcr，可以肯定再次p，条带单一。KOD酶保真性非常好，p过几次2500bp无突变，用它pcr两次引入突变的概率不大。

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13楼2017-04-27 09:02:20

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lusandanooo

银虫 (小有名气)

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没事啊，只要有片段就行了，想特异性好可以提高退火温度，或者做胶回收然后以胶回收产物为模板再P。

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毕了业真开心嘻嘻嘻嘻嘻

14楼2017-04-27 11:51:12

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