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新虫 (初入文坛)

[求助] 将重组质粒转入农杆菌中,长出的不是农杆菌

各位大神,求帮忙,急急急!:
我构建的载体是PBI121+目的基因(4302bp),现在要把它转入到农杆菌中。使用的农杆菌是GV3101,但是转入到农杆菌中去,长出的是一种乳白色的菌落,而且每个平板中也只会长一两个菌落,PCR结果并无目的条带。老师说长出的菌落并不是农杆菌,可能是杂菌污染。
重新做过农杆菌的感受态,用同学的重组质粒转化过(同学的重组质粒没有问题,已经转化成功过),结果她的平板长出的菌落正常,老师说是正常的农杆菌,但我跟她一起转的重组质粒长出的菌落依旧是乳白色菌落,已经重复过很多次,每次都是这种现象,质粒也重新提过,结果都是一样。
转化农杆菌使用冻融法,实验室条件有限,没有电转设备。
请各位大神帮忙分析分析,我实在是不知道要怎么办了,老师也在催,自己也只能干着急,求各位好心人帮帮忙!
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我欲乘风归去

木虫 (正式写手)

平板抗性用对了吗? (质粒抗性+利福平)
重组质粒酶切验证下是否正确。
如果上述两步没有问题,转化多加点质粒模板(600ng-1ug),热击后可以加点带质粒抗性的LB培养液震荡培养5-6h,再去涂平板。
2楼2017-04-23 17:30:07
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xiaokang3286

新虫 (初入文坛)

你好,我最近也遇上这个问题了,请问你是怎么解决的
3楼2019-01-28 11:56:19
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列文虎克

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by xiaokang3286 at 2019-01-28 11:56:19
你好,我最近也遇上这个问题了,请问你是怎么解决的

我也遇上了这个问题,同学你解决了吗
4楼2019-03-30 21:23:11
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