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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 全长序列扩增
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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machao8405

兑换贵宾

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

[求助] 全长序列扩增 已有3人参与

全长序列引物设计并没有太多的选择，扩增不出目的条带该怎么办？

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1楼 2017-04-19 21:35:16
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zhaozhibozhi

版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-04-20 07:44:51
模版是基因组dna还是cDNA？做什么用呢？如果是表达的话，3'端可以往后设计啊

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做一个阳光、开朗的小和尚
2楼2017-04-20 00:20:04
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本田透1990

超级版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by machao8405 at 2017-04-21 07:37:54
关键序列也不长1000多  用分段搭桥么
...

序列这么短的话，你就可以考虑更换扩增方式，例如更换不同的酶，更换扩增条件，选用不同的pcr方式
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6楼2017-04-21 08:32:21
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普通回帖

本田透1990

主管区长

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
分段扩增，进行搭桥
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3楼2017-04-20 16:46:15
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machao8405

管理员

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
3楼: Originally posted by 本田透1990 at 2017-04-20 16:46:15
分段扩增，进行搭桥

这样错配几率会不会增加？我后期做过量表达用的

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4楼2017-04-21 07:28:52
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machao8405

专家顾问

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
3楼: Originally posted by 本田透1990 at 2017-04-20 16:46:15
分段扩增，进行搭桥

关键序列也不长1000多  用分段搭桥么

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5楼2017-04-21 07:37:54
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machao8405

管理员

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
6楼: Originally posted by 本田透1990 at 2017-04-21 08:32:21
序列这么短的话，你就可以考虑更换扩增方式，例如更换不同的酶，更换扩增条件，选用不同的pcr方式...

用了好多酶  降落加热启动都做了  没有明显目的条带  非特异扩增很多

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7楼2017-04-21 08:33:47
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stone2239

超级版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
7楼: Originally posted by machao8405 at 2017-04-21 08:33:47
用了好多酶  降落加热启动都做了  没有明显目的条带  非特异扩增很多
...

不如直接合成全长，一千多bp现在也不是很贵吧。
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8楼2017-04-22 16:41:42
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宁文峰

版主
引用回帖:
4楼: Originally posted by machao8405 at 2017-04-21 07:28:52
这样错配几率会不会增加？我后期做过量表达用的
...

会

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9楼2017-04-22 22:56:30
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ULYSSEESWB

主管区长

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

模板不行。。。
直接买含有该基因的质粒
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10楼2017-04-23 00:57:34
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