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machao8405

木虫 (正式写手)

[求助] 全长序列扩增 已有3人参与

全长序列引物设计并没有太多的选择,扩增不出目的条带该怎么办?

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zhaozhibozhi

金虫 (正式写手)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-04-20 07:44:51
模版是基因组dna还是cDNA?做什么用呢?如果是表达的话,3'端可以往后设计啊

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做一个阳光、开朗的小和尚
2楼2017-04-20 00:20:04
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本田透1990

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by machao8405 at 2017-04-21 07:37:54
关键序列也不长1000多  用分段搭桥么
...

序列这么短的话,你就可以考虑更换扩增方式,例如更换不同的酶,更换扩增条件,选用不同的pcr方式
6楼2017-04-21 08:32:21
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普通回帖

本田透1990

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
分段扩增,进行搭桥
3楼2017-04-20 16:46:15
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machao8405

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 本田透1990 at 2017-04-20 16:46:15
分段扩增,进行搭桥

这样错配几率会不会增加?我后期做过量表达用的

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4楼2017-04-21 07:28:52
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machao8405

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 本田透1990 at 2017-04-20 16:46:15
分段扩增,进行搭桥

关键序列也不长1000多  用分段搭桥么

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5楼2017-04-21 07:37:54
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machao8405

木虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 本田透1990 at 2017-04-21 08:32:21
序列这么短的话,你就可以考虑更换扩增方式,例如更换不同的酶,更换扩增条件,选用不同的pcr方式...

用了好多酶  降落加热启动都做了  没有明显目的条带  非特异扩增很多

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7楼2017-04-21 08:33:47
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
7楼: Originally posted by machao8405 at 2017-04-21 08:33:47
用了好多酶  降落加热启动都做了  没有明显目的条带  非特异扩增很多
...

不如直接合成全长,一千多bp现在也不是很贵吧。
8楼2017-04-22 16:41:42
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引用回帖:
4楼: Originally posted by machao8405 at 2017-04-21 07:28:52
这样错配几率会不会增加?我后期做过量表达用的
...



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9楼2017-04-22 22:56:30
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ULYSSEESWB

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

模板不行。。。
直接买含有该基因的质粒
10楼2017-04-23 00:57:34
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