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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 枯草杆菌扫描电镜找不到菌体
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395146894

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 枯草杆菌扫描电镜找不到菌体 已有3人参与

做的扫描电镜，但找不到菌体，前辈能不能指教一下
        前处理是：1）LB肉汤，4500rpm 收集菌体；2）0.2M PBS 洗涤菌体；3)加菌液到盖破片；4）2.5%戊二醛固定4h；5）50、70、80、90和100%乙醇梯度脱水：6）50和100%叔丁醇置换；7）冻干

枯草杆菌扫描电镜找不到菌体
菌1.png


枯草杆菌扫描电镜找不到菌体-1
菌1+抑制剂.png


枯草杆菌扫描电镜找不到菌体-2
菌2.png


枯草杆菌扫描电镜找不到菌体-3
菌2+抑制剂.png
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1楼 2017-04-19 19:47:45
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BUA.刘政

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by BUA.刘政 at 2017-12-28 10:08:24
您好，叔丁醇置换15分钟不就又凝固了，还有离心

离心用4℃也会凝固

发自小木虫Android客户端
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7楼2017-12-28 10:09:01
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郑丽君-CC

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我的叔丁醇是固体的，请问100%叔丁醇还怎么做 的？
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2楼2017-05-05 10:16:59
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gc1016670506

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by 郑丽君-CC at 2017-05-05 10:16:59
我的叔丁醇是固体的，请问100%叔丁醇还怎么做 的？

直接买液体的不就完了，很贵吗？
赞一下 回复此楼
3楼2017-05-05 16:07:01
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gc1016670506

铁虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★
小冀-: 金币+5, 鼓励回帖交流 2017-05-06 12:04:45
收集对数生长期的新鲜菌液（过夜就差不多了），无菌水洗涤3次，置于2.5%戊二醛磷酸缓冲液（pH7.2）中，于4℃固定过夜；次日以0.15%的同一缓冲液冲洗；然后依次用40%、70%、90%和100%的乙醇分别脱水15 min；脱水后用醋酸戊脂置换乙醇；将上述样品于真空冷冻干燥机中干燥
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4楼2017-05-05 16:08:20
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