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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助：PCR及引物设计相关问题！
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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guoxingjun2008

金虫 (正式写手)

[交流] 求助：PCR及引物设计相关问题！

最近PCR老是P不出来，电泳检测时候什么都没有，我怀疑引物是不是有问题。
  下面是我要扩增的序列：
   ATGAAGACGGGAGCGGCTACCCTTTTAATGCTTGCACTTCTCATGCCAGTAACAAGACAATTCTTTTTGCCAGTTCTCCCAATCTTCACCTGGTTGGTTT TCTTTTTCAATGCTCGATTTATTCCTGCCGAATATCGACCACATATCTGGGTTAAAGTTCTACCTGCCCTCGAAAATATCTTTTACGGTGCAAACATTAG CAACATTCTCTCGGCACACCAATATGTCGTTCTTGATGTCCTAGCATGGTTACCCTATGGAATTCTACACTTTGGAGGACCGTTTGTTTGGGCCGCCTTG ATGTTCCTTTTCGGTCCTCCCGGTACCGTACCAGTATTCGCGCGAACTTTCGGTTACCTGAACATCATTGGAGTTGCCATTCAACTGATCTTCCCTTGTT CGCCTCCATGGTATGAGAATTTGTATGGTCTTGCGCCTGCCAACTATTCCATGGAAGGATCACCTGCAGGTCTCGCACGAATCGATTTACTATTCGGGTT TGACATGTACACAACGAACTTTACCGCATCACCTTTGGTGTTTGGAGCTTTCCCATCATTGCATTCTGGTAATGCAGTATTGGAAGCACTTTTCATGAGC CATTGCTTCCCAAAACTTAGACCATTCGTCATCGGATACGCCATGTGGATGTGGTGGGCAACCATGTATCTATCTCACCATTACGCCGTTGATCTCGTAG CCGGAGGTTTCCTTGCCGCTATTGCTTTCTATATCTCCAAGACAAACTTTTTGCCAAGAATTCAAGCAGACAAGATGTTCCGTTGGGATTATGACTATGT TGAGAGAGGTGATGCACCTACTGGCATTTACGAATATGGACTTGCAGTTCTCGACCAAGATTTCCGTCACGATAGTAGTGACGAATGGACCATGGGATCG TCCTCTTCCTTTTCTTCTGGATCAAGAAGCCCAACTGATGAAAACGGATCAGCATGGGAAGGTGATACCCTGGCATCTCAAGCTTCGGATAGTGAGCTTA GTGAGGTCATTGTTAGGTGA

总共有1020bp，请高手朋友帮我设计一下引物，看看和我自己的引物有多大的差别，谢谢！！
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1楼 2009-01-04 16:12:23
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guoxingjun2008

金虫 (正式写手)
我的反应体系是：
  Buffer       2ul
   dNTP       1.6ul
   上游引物  0.4ul
   下游引物  0.4ul
    taq酶    0.3ul
    模板     1ul
    水        14.3ul
总体积：     20ul
   
94°预变性  5min
94°     30‘
64°     45’
72°     1min
72°     延伸10min
30个循环

  看看有没有什么大的问题？
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6楼2009-01-05 10:54:10
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2004371310

木虫 (著名写手)
没有BB
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2楼2009-01-04 21:54:50
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figo.339

木虫 (著名写手)
一般来讲只要设计好了引物应该不会有问题的，而且即使有引物二聚体也在电泳时100bp左右有条带的。所以应该检查一下你的体系。还有退货温度。
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3楼2009-01-04 22:22:17
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
我个人认为，很大一部分原因是认为操作引起的，每一步你都认真的按照protocal去做，估计没问题，因为这是最最基本的了

[ Last edited by sutao1979 on 2009-1-4 at 22:29 ]
赞一下 回复此楼
会当凌绝顶，一览众山小
4楼2009-01-04 22:27:31
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