应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助：PCR及引物设计相关问题！
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
71/1返回列表
查看: 476  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

guoxingjun2008

金虫 (正式写手)

[交流] 求助：PCR及引物设计相关问题！

最近PCR老是P不出来，电泳检测时候什么都没有，我怀疑引物是不是有问题。
  下面是我要扩增的序列：
   ATGAAGACGGGAGCGGCTACCCTTTTAATGCTTGCACTTCTCATGCCAGTAACAAGACAATTCTTTTTGCCAGTTCTCCCAATCTTCACCTGGTTGGTTT TCTTTTTCAATGCTCGATTTATTCCTGCCGAATATCGACCACATATCTGGGTTAAAGTTCTACCTGCCCTCGAAAATATCTTTTACGGTGCAAACATTAG CAACATTCTCTCGGCACACCAATATGTCGTTCTTGATGTCCTAGCATGGTTACCCTATGGAATTCTACACTTTGGAGGACCGTTTGTTTGGGCCGCCTTG ATGTTCCTTTTCGGTCCTCCCGGTACCGTACCAGTATTCGCGCGAACTTTCGGTTACCTGAACATCATTGGAGTTGCCATTCAACTGATCTTCCCTTGTT CGCCTCCATGGTATGAGAATTTGTATGGTCTTGCGCCTGCCAACTATTCCATGGAAGGATCACCTGCAGGTCTCGCACGAATCGATTTACTATTCGGGTT TGACATGTACACAACGAACTTTACCGCATCACCTTTGGTGTTTGGAGCTTTCCCATCATTGCATTCTGGTAATGCAGTATTGGAAGCACTTTTCATGAGC CATTGCTTCCCAAAACTTAGACCATTCGTCATCGGATACGCCATGTGGATGTGGTGGGCAACCATGTATCTATCTCACCATTACGCCGTTGATCTCGTAG CCGGAGGTTTCCTTGCCGCTATTGCTTTCTATATCTCCAAGACAAACTTTTTGCCAAGAATTCAAGCAGACAAGATGTTCCGTTGGGATTATGACTATGT TGAGAGAGGTGATGCACCTACTGGCATTTACGAATATGGACTTGCAGTTCTCGACCAAGATTTCCGTCACGATAGTAGTGACGAATGGACCATGGGATCG TCCTCTTCCTTTTCTTCTGGATCAAGAAGCCCAACTGATGAAAACGGATCAGCATGGGAAGGTGATACCCTGGCATCTCAAGCTTCGGATAGTGAGCTTA GTGAGGTCATTGTTAGGTGA

总共有1020bp，请高手朋友帮我设计一下引物，看看和我自己的引物有多大的差别，谢谢！！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-01-04 16:12:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

2004371310

木虫 (著名写手)
没有BB
回复此楼
2楼2009-01-04 21:54:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

figo.339

木虫 (著名写手)
一般来讲只要设计好了引物应该不会有问题的，而且即使有引物二聚体也在电泳时100bp左右有条带的。所以应该检查一下你的体系。还有退货温度。
赞一下 回复此楼
3楼2009-01-04 22:22:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
我个人认为，很大一部分原因是认为操作引起的，每一步你都认真的按照protocal去做，估计没问题，因为这是最最基本的了

[ Last edited by sutao1979 on 2009-1-4 at 22:29 ]
赞一下 回复此楼
会当凌绝顶，一览众山小
4楼2009-01-04 22:27:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guoxingjun2008

金虫 (正式写手)
对，在100bp左右就是有一条带，那应该就是没有结合上的引物！
赞一下 回复此楼
5楼2009-01-05 10:50:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guoxingjun2008

金虫 (正式写手)
我的反应体系是：
  Buffer       2ul
   dNTP       1.6ul
   上游引物  0.4ul
   下游引物  0.4ul
    taq酶    0.3ul
    模板     1ul
    水        14.3ul
总体积：     20ul
   
94°预变性  5min
94°     30‘
64°     45’
72°     1min
72°     延伸10min
30个循环

  看看有没有什么大的问题？
赞一下 回复此楼
6楼2009-01-05 10:54:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaomuchongfei

退火温度很高啊 Tm多少
赞一下 回复此楼
7楼2009-01-05 11:06:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 guoxingjun2008 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 330一志愿中国海洋大学 化学工程 085602 有读博意愿 求调剂 +3 wywy.. 2026-03-27 4/200 2026-03-28 03:32 by fmesaito
[考研] 张芳铭-中国农业大学-环境工程专硕-298 +3 手机用户 2026-03-26 3/150 2026-03-27 21:39 by lbsjt
[考研] 070300求调剂306分 +3 26要上岸 2026-03-27 3/150 2026-03-27 17:57 by arrow8852
[考研] 308求调剂 +6 墨墨漠 2026-03-27 6/300 2026-03-27 15:20 by caszguilin
[考研] 复试调剂，一志愿南农083200食品科学与工程 +5 XQTJZ 2026-03-26 5/250 2026-03-27 14:49 by 狂炫麦当当
[考研] 085600，材料与化工321分，求调剂 +9 大馋小子 2026-03-27 9/450 2026-03-27 14:30 by mmm just
[考研] 322求调剂 +4 我真的很想学习 2026-03-23 4/200 2026-03-27 13:51 by 杨杨杨紫
[考研] 348求调剂 +4 小懒虫不懒了 2026-03-27 5/250 2026-03-27 12:47 by 果果妈咪
[考研] 材料求调剂 +8 @taotao 2026-03-21 8/400 2026-03-27 11:21 by wangjy2002
[考研] 一志愿武汉理工，总分321，英一数二，求老师收留。 +5 nnnnnnn5 2026-03-25 5/250 2026-03-27 04:42 by wxiongid
[考研] 349求调剂 +4 李木子啊哈哈 2026-03-25 4/200 2026-03-26 22:49 by fmesaito
[考研] 321求调剂 +6 wasdssaa 2026-03-26 6/300 2026-03-26 20:57 by sanrepian
[考研] 325求调剂 +3 Aoyijiang 2026-03-23 3/150 2026-03-26 20:46 by 不吃魚的貓
[考研] 求调剂 +8 Auroracx 2026-03-22 8/400 2026-03-26 19:55 by 不吃魚的貓
[考研] 086000生物与医药292求调剂 +6 小小陈小小 2026-03-22 9/450 2026-03-26 15:58 by dick_runner
[考研] 299求调剂 +4 15188958825 2026-03-25 4/200 2026-03-25 22:56 by 418490947
[考研] 334分 一志愿武理-080500 材料求调剂 +4 李李不服输 2026-03-25 4/200 2026-03-25 21:26 by 星空星月
[考研] 318求调剂 +3 plum李子 2026-03-23 3/150 2026-03-25 09:42 by 雾散后相遇lc
[考研] 接收2026硕士调剂(学硕+专硕) +4 allen-yin 2026-03-23 6/300 2026-03-23 15:04 by 汪！？！
[考研] 生物学调剂 +5 Surekei 2026-03-21 5/250 2026-03-22 14:39 by tcx007
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭