24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 470  |  回复: 6
当前主题已经存档。

guoxingjun2008

金虫 (正式写手)

[交流] 求助:PCR及引物设计相关问题!

最近PCR老是P不出来,电泳检测时候什么都没有,我怀疑引物是不是有问题。
  下面是我要扩增的序列:
   ATGAAGACGGGAGCGGCTACCCTTTTAATGCTTGCACTTCTCATGCCAGTAACAAGACAATTCTTTTTGCCAGTTCTCCCAATCTTCACCTGGTTGGTTT TCTTTTTCAATGCTCGATTTATTCCTGCCGAATATCGACCACATATCTGGGTTAAAGTTCTACCTGCCCTCGAAAATATCTTTTACGGTGCAAACATTAG CAACATTCTCTCGGCACACCAATATGTCGTTCTTGATGTCCTAGCATGGTTACCCTATGGAATTCTACACTTTGGAGGACCGTTTGTTTGGGCCGCCTTG ATGTTCCTTTTCGGTCCTCCCGGTACCGTACCAGTATTCGCGCGAACTTTCGGTTACCTGAACATCATTGGAGTTGCCATTCAACTGATCTTCCCTTGTT CGCCTCCATGGTATGAGAATTTGTATGGTCTTGCGCCTGCCAACTATTCCATGGAAGGATCACCTGCAGGTCTCGCACGAATCGATTTACTATTCGGGTT TGACATGTACACAACGAACTTTACCGCATCACCTTTGGTGTTTGGAGCTTTCCCATCATTGCATTCTGGTAATGCAGTATTGGAAGCACTTTTCATGAGC CATTGCTTCCCAAAACTTAGACCATTCGTCATCGGATACGCCATGTGGATGTGGTGGGCAACCATGTATCTATCTCACCATTACGCCGTTGATCTCGTAG CCGGAGGTTTCCTTGCCGCTATTGCTTTCTATATCTCCAAGACAAACTTTTTGCCAAGAATTCAAGCAGACAAGATGTTCCGTTGGGATTATGACTATGT TGAGAGAGGTGATGCACCTACTGGCATTTACGAATATGGACTTGCAGTTCTCGACCAAGATTTCCGTCACGATAGTAGTGACGAATGGACCATGGGATCG TCCTCTTCCTTTTCTTCTGGATCAAGAAGCCCAACTGATGAAAACGGATCAGCATGGGAAGGTGATACCCTGGCATCTCAAGCTTCGGATAGTGAGCTTA GTGAGGTCATTGTTAGGTGA

总共有1020bp,请高手朋友帮我设计一下引物,看看和我自己的引物有多大的差别,谢谢!!
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

2004371310

木虫 (著名写手)

没有BB
2楼2009-01-04 21:54:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

figo.339

木虫 (著名写手)

一般来讲只要设计好了引物应该不会有问题的,而且即使有引物二聚体也在电泳时100bp左右有条带的。所以应该检查一下你的体系。还有退货温度。
3楼2009-01-04 22:22:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader

我个人认为,很大一部分原因是认为操作引起的,每一步你都认真的按照protocal去做,估计没问题,因为这是最最基本的了

[ Last edited by sutao1979 on 2009-1-4 at 22:29 ]
会当凌绝顶,一览众山小
4楼2009-01-04 22:27:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guoxingjun2008

金虫 (正式写手)

对,在100bp左右就是有一条带,那应该就是没有结合上的引物!
5楼2009-01-05 10:50:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guoxingjun2008

金虫 (正式写手)

我的反应体系是:
  Buffer       2ul
   dNTP       1.6ul
   上游引物  0.4ul
   下游引物  0.4ul
    taq酶    0.3ul
    模板     1ul
    水        14.3ul
总体积:     20ul
   
94°预变性  5min
94°     30‘
64°     45’
72°     1min
72°     延伸10min
30个循环

  看看有没有什么大的问题?
6楼2009-01-05 10:54:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaomuchongfei

退火温度很高啊 Tm多少
7楼2009-01-05 11:06:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 guoxingjun2008 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 289求调剂 +6 新时代材料 2026-03-27 6/300 2026-03-27 16:19 by 不吃魚的貓
[考研] 一志愿北京化工大学 070300 学硕 336分 求调剂 +9 vv迷 2026-03-22 9/450 2026-03-27 15:59 by 不吃魚的貓
[考研] 283求调剂(080500) +4 A child 2026-03-27 4/200 2026-03-27 15:34 by XPU李庆
[考研] 266求调剂 +8 阳阳哇塞 2026-03-27 9/450 2026-03-27 15:29 by caszguilin
[考研] 一志愿北化085600材料专硕275|有文章专利|求调剂 +3 Micky11223 2026-03-25 3/150 2026-03-27 14:52 by 醉在风里
[考研] 085600,材料与化工321分,求调剂 +9 大馋小子 2026-03-27 9/450 2026-03-27 14:30 by mmm just
[考研] 0703化学求调剂,各位老师看看我!!! +4 祁祺祺 2026-03-25 4/200 2026-03-27 13:55 by stillstella
[考研] 求调剂 +3 刘柯@ 2026-03-24 4/200 2026-03-27 11:28 by shangxh
[考研] 0856材料专硕353求调剂 +9 NIFFFfff 2026-03-20 9/450 2026-03-27 10:13 by dick_runner
[考研] 求调剂,一志愿 南京航空航天大学大学 ,080500材料科学与工程学硕 +4 @taotao 2026-03-26 5/250 2026-03-27 08:10 by hypershenger
[考研] 一志愿华理,数一英一285求A区调剂 +8 AZMK 2026-03-25 10/500 2026-03-26 22:37 by 学员8dgXkO
[考研] 085602 289分求调剂 +8 WWW西西弗斯 2026-03-24 8/400 2026-03-26 16:33 by 不吃魚的貓
[考研] 求调剂 +3 李李不服输 2026-03-25 3/150 2026-03-25 13:03 by cmz0325
[考研] 306求0703调剂一志愿华中师范 +10 纸鱼ly 2026-03-21 11/550 2026-03-24 17:22 by qingfeng258
[考研] 一志愿南航材料专317分求调剂 +5 炸呀炸呀炸薯条 2026-03-23 5/250 2026-03-24 16:52 by 星空星月
[基金申请] 请教下大家 2026年国家基金申请是双盲审吗? +3 lishucheng1 2026-03-22 5/250 2026-03-24 08:22 by gltch
[考研] 361求调剂 +3 Glack 2026-03-22 3/150 2026-03-23 22:03 by fuyu_
[考研] 336化工调剂 +4 王大坦1 2026-03-23 5/250 2026-03-23 18:32 by allen-yin
[考研] 一志愿深大,0703化学,总分302,求调剂 +4 七月-七七 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:20 by 学员8dgXkO
[考研] A区线材料学调剂 +5 周周无极 2026-03-20 5/250 2026-03-20 21:33 by laoshidan
信息提示
请填处理意见