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智明寻找春娇

新虫 (初入文坛)

[求助] SDS-PAGE电泳问题求助,已经心力交瘁了。 已有3人参与

最近在做WB,跑SDS-PAGE一直没有跑出来,甚至连溴酚蓝都跑不出来。
三天中换了如下部分
换了两种提蛋白的方法,研磨法和超声法
换了两种配胶方法,自己配的试剂制胶以及用试剂盒制胶。
换了不同的电泳仪以及电泳槽。




Marker也没有跑出来,所以求问什么原因!
从左到右分别是Buffer,Marker,Sample1-4,BUFFER
Sample1-4.中,1,2是同种样品不同煮沸时间用研磨法;3,4是同种样品不同煮沸时间用超声波法。

SDS-PAGE电泳问题求助,已经心力交瘁了。


SDS-PAGE电泳问题求助,已经心力交瘁了。-1


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十四_14

荣誉版主 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
先考虑制胶以及电泳条件的问题  因为连marker都跑不出来  那很可能就是胶本身的问题
你的缓冲液pH合适么
3楼2017-04-18 08:58:57
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
其实你应该换个人来做一遍WB。
4楼2017-04-18 09:30:24
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大优仔

新虫 (初入文坛)

5楼2017-04-18 23:35:48
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旖秦

银虫 (小有名气)

会不会是电泳仪的珀金丝坏了?你带着自己的胶,电泳液去其他实验室试一试。

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10楼2017-04-19 14:48:16
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普通回帖

智明寻找春娇

新虫 (初入文坛)

2楼2017-04-18 08:34:22
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zkapan

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

6楼2017-04-18 23:51:09
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alicelchf

木虫 (著名写手)

电极反了吧,跟样品没关

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修身、齐家、治国、平天下
7楼2017-04-18 23:56:26
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你也笑靥如花

新虫 (初入文坛)

看一下电极是不是反了,MARK都跑不出来,胶的问题也很大

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8楼2017-04-19 11:07:15
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QQ890914

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
1楼: Originally posted by 智明寻找春娇 at 2017-04-17 19:36:09
最近在做WB,跑SDS-PAGE一直没有跑出来,甚至连溴酚蓝都跑不出来。
三天中换了如下部分
换了两种提蛋白的方法,研磨法和超声法
换了两种配胶方法,自己配的试剂制胶以及用试剂盒制胶。
换了不同的电泳仪以及电泳槽。 ...

参考三楼,1.买商品化聚丙烯酰胺等;2.重新配置,调好ph

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9楼2017-04-19 12:49:01
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