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酵母转化
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做了一两个月了，酵母转化一直不成功，请做过相关实验的小伙伴给点建议！！！ 我的载体是pPICZaA，酵母菌株是GS115，用SacI酶切质粒线性化，用的10x 的体系（质粒共10ug），酶切后纯化得到质粒，再转化到GS115中，可是问题是酶切后的质粒浓度很低，还不到100ng/ul，转化要求加入5-10ug 质粒！哪位朋友可以给点意见，非常感谢 发自小木虫Android客户端 |
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张凡云
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4楼2017-04-17 07:27:43
choujiaoqi
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可以考虑换个菌种，有的菌种跟转进去的质粒不兼容，导致一个细胞内质粒拷贝数少。还有是不是质粒太大，转进去难度大 发自小木虫IOS客户端 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
3楼2017-04-17 00:20:50
2楼2017-04-16 23:34:02
5楼2017-04-18 00:20:14
送红花一朵|
谢谢回帖！质粒才1400bp，理论上是能转进去的，只是pcr鉴定有目的条带之后，测序总是失败，是不是需要纯化菌落？我纯化之后的菌落做pcr有的有条带，有的没有，不知道为什么？ 发自小木虫Android客户端 |
6楼2017-04-18 00:26:10
Romanticman
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7楼2017-04-18 00:28:12
8楼2017-04-18 00:30:08
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这个没有做过，我们有做酵母双杂交实验，过程和你的相似，阳性鉴定时如果有阳性，测序又不正确，很有可能是假阳性，建议阳性鉴定采用混合引物 发自小木虫Android客户端 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
9楼2017-04-18 00:33:26
送红花一朵|
谢谢这么晚了回帖！我载体引物和特异性引物都用了，理论上来说，pcr有条带就差不多是正确的，可是提质粒，用质粒测序失败，所以很纠结到底有没有转进去。今天挑了100多个菌落重新pcr，同样还是有目的条带的，打算拿pcr产物去测序，看结果怎样？我们实验室成功做了酵母单杂了，方法原理其实都差不多吧，但是卡在这一步真的很无奈，，， 发自小木虫Android客户端 |
10楼2017-04-18 00:39:15