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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 酵母转化
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270782719

新虫 (小有名气)
★
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电转化效率高一些，可以检测一下有没有酶活力
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11楼2017-04-19 08:26:24
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钟颖小确幸

新虫 (初入文坛)
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我做了，感觉转化效率挺高的
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12楼2017-04-20 15:44:56
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xxl520zry
我

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13楼2017-04-20 15:48:09
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一尾潜水的鱼

新虫 (初入文坛)
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9楼: Originally posted by Romanticman at 2017-04-18 00:33:26
这个没有做过，我们有做酵母双杂交实验，过程和你的相似，阳性鉴定时如果有阳性，测序又不正确，很有可能是假阳性，建议阳性鉴定采用混合引物
...

你好，我正在做酵母双杂，也有出现这种情况，想请教你。
就是带有目的基因的质粒转化到酵母中，用特异引物做 pcr可以检测到条带，但是反过来检测该纯质粒时，发现怎么也检测不出来条带，不知道什么原因，，，已经转进目的基因的酵母，对它提质粒，可以检测到目的条带吗？
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14楼2017-05-07 15:34:04
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Romanticman

新虫 (正式写手)
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10楼: Originally posted by 曾小旭 at 2017-04-18 00:39:15
谢谢这么晚了回帖！我载体引物和特异性引物都用了，理论上来说，pcr有条带就差不多是正确的，可是提质粒，用质粒测序失败，所以很纠结到底有没有转进去。今天挑了100多个菌落重新pcr，同样还是有目的条带的，打算拿 ...

为什么不送菌液测序呢？

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15楼2017-05-08 17:13:08
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270782719

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
酶切后不要用胶回收，得率低，可采乙酸钠加醇析出

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16楼2017-05-21 07:08:18
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荣rong006

新虫 (小有名气)
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8楼: Originally posted by 曾小旭 at 2017-04-18 00:30:08
在酵母中表达一种酶，做酶的功能
...

我也要在酵母中表达一种酶，做酶的催化功能。你转酵母的质粒线性化问题解决了吗？我也遇到线性化质粒浓度低的问题
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17楼2019-08-12 10:23:12
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tomment

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
您好，我需要pPICZaA质粒，可否馈赠，购买也行。
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18楼2019-11-15 20:36:53
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