应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助PCR遇到的问题
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 479  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

zzm7806

[交流] 求助PCR遇到的问题

我的目的基因为单链DNA，在尾部有一段发卡结构，约120nt。在PCR过程中出现问题，不能得到扩增结果。请教各前辈，是否有针对这种情况的扩增酶，或是否有能将其推平的方法。
谢谢大家了！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-01-04 09:13:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zzm7806

感谢

引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2009-1-4 09:58:
提高变性温度和时间，提高退火温度
还有用降落PCR
实在不行，加5%（剂量需要摸，以1%为梯度，但一般很少用到15%）左右的DMSO

感谢你的关注和帮助。
我在多次PCR尝试过程中也应用了很多不同的条件（变性温度和时间相应提高、退火温度也试了很多，体系中各成分含量也相应调整过）但是从来都没有出现过我的目的条带。（是一点都没有）
您建议的降落PCR，我没有试过，以前也没有接触过，我了解后尝试一下。
另外，DMSO应用在我的PCR中作用是什么呢？我只知道它与GC含量有点关系。
再次表示感谢！
赞一下 回复此楼
3楼2009-01-04 14:52:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
提高变性温度和时间，提高退火温度
还有用降落PCR
实在不行，加5%（剂量需要摸，以1%为梯度，但一般很少用到15%）左右的DMSO
赞一下 回复此楼
2楼2009-01-04 09:58:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
DMSO应用在我的PCR中作用是什么呢？
可以提高pcr扩增条带的特异性（效率和专一性），扩增一些比较难扩增的模板，一般常用的浓度为2~10％，当DNA 片段模板的GC 含量太高时，DMSO 可以改变引物DNA 模板杂交（Hybridization）的温度（Tm）。但是，过量的dmso也可以抑制模板的扩增，主要是抑制聚合酶的活性，所以，用之前需要小量摸索。
赞一下 回复此楼
会当凌绝顶，一览众山小
4楼2009-01-04 17:52:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 2026年华南师范大学欢迎化学，化工，生物，生医工等专业优秀学子加入！ +3 llss0711 2026-03-28 6/300 2026-03-29 10:26 by llss0711
[考研] 一志愿北京理工大学本科211材料工程294求调剂 +7 mikasa的围巾 2026-03-28 7/350 2026-03-29 10:21 by ms629
[考研] 一志愿华东师范大学有机化学专业，初试351分，复试被刷求调剂! +3 真名有冰 2026-03-29 4/200 2026-03-29 08:47 by qingfeng258
[考研] 347求调剂 +3 山顶见α 2026-03-25 3/150 2026-03-28 14:13 by 唐沐儿
[考研] 0703一志愿9，初试成绩：338，四六级已过，有科研经历，求调剂！ +4 Zuhui0306 2026-03-25 4/200 2026-03-28 13:07 by 唐沐儿
[考研] 286求调剂 +12 PolarBear11 2026-03-26 12/600 2026-03-28 12:14 by zllcz
[考研] 求调剂推荐 材料 304 +15 荷包蛋hyj 2026-03-26 15/750 2026-03-28 04:13 by fmesaito
[考研] 291求调剂 +7 孅華 2026-03-22 7/350 2026-03-28 04:02 by fmesaito
[考研] 265求调剂 +8 小木虫085600 2026-03-27 8/400 2026-03-27 22:16 by 无际的草原
[考研] 265求调剂11408 +3 刘小鹿lu 2026-03-27 3/150 2026-03-27 20:53 by nihaoar
[考研] 考研调剂 +4 Sanmu-124 2026-03-26 4/200 2026-03-27 17:49 by kiokin
[考研] 314求调剂 +3 溪云珂 2026-03-26 3/150 2026-03-27 11:20 by sanrepian
[考研] 调剂 +3 李嘉图·S·路 2026-03-27 3/150 2026-03-27 11:19 by wangjy2002
[考研] 0703化学一志愿南京师范大学303求调剂 +3 zzffylgg 2026-03-24 3/150 2026-03-27 10:42 by shangxh
[考研] 材料调剂 +8 匹克i 2026-03-23 8/400 2026-03-27 08:11 by hypershenger
[考研] 281求调剂 +6 Koxui 2026-03-24 7/350 2026-03-26 15:37 by 无际的草原
[考研] 材料与化工328分调剂 +6 。，。，。，。i 2026-03-23 6/300 2026-03-25 22:30 by 418490947
[考研] 334分 一志愿武理-080500 材料求调剂 +4 李李不服输 2026-03-25 4/200 2026-03-25 21:26 by 星空星月
[考研] 085404电子信息284分求调剂 +4 13659058978 2026-03-24 4/200 2026-03-24 12:15 by syl20081243
[考研] 一志愿河北工业大学0817化工278分求调剂 +7 jhybd 2026-03-23 12/600 2026-03-24 09:03 by jhybd
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭