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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助PCR遇到的问题
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zzm7806

[交流] 求助PCR遇到的问题

我的目的基因为单链DNA，在尾部有一段发卡结构，约120nt。在PCR过程中出现问题，不能得到扩增结果。请教各前辈，是否有针对这种情况的扩增酶，或是否有能将其推平的方法。
谢谢大家了！
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1楼 2009-01-04 09:13:51
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
提高变性温度和时间，提高退火温度
还有用降落PCR
实在不行，加5%（剂量需要摸，以1%为梯度，但一般很少用到15%）左右的DMSO
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2楼2009-01-04 09:58:07
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zzm7806

感谢

引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2009-1-4 09:58:
提高变性温度和时间，提高退火温度
还有用降落PCR
实在不行，加5%（剂量需要摸，以1%为梯度，但一般很少用到15%）左右的DMSO

感谢你的关注和帮助。
我在多次PCR尝试过程中也应用了很多不同的条件（变性温度和时间相应提高、退火温度也试了很多，体系中各成分含量也相应调整过）但是从来都没有出现过我的目的条带。（是一点都没有）
您建议的降落PCR，我没有试过，以前也没有接触过，我了解后尝试一下。
另外，DMSO应用在我的PCR中作用是什么呢？我只知道它与GC含量有点关系。
再次表示感谢！
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3楼2009-01-04 14:52:35
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
DMSO应用在我的PCR中作用是什么呢？
可以提高pcr扩增条带的特异性（效率和专一性），扩增一些比较难扩增的模板，一般常用的浓度为2~10％，当DNA 片段模板的GC 含量太高时，DMSO 可以改变引物DNA 模板杂交（Hybridization）的温度（Tm）。但是，过量的dmso也可以抑制模板的扩增，主要是抑制聚合酶的活性，所以，用之前需要小量摸索。
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会当凌绝顶，一览众山小
4楼2009-01-04 17:52:11
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