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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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zqt123_1981

木虫 (小有名气)

[交流] loading buffer 的作用

我想知道在做PCR电泳时加loading buffer 的作用是什么?多点少点有没有影响

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-23 at 13:22 ]
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★
350784478(金币+2,VIP+0): 10-23 13:22
1、增加样品比重,提高沉降率使得核酸能够沉进孔里
2、含有电泳指示剂,如溴酚蓝、二甲苯青等
3、还有一些含有SDS,能够中止酶促反应,加了之后可以灭活酶然后电泳回收核酸

多没关系,少就有关系
比如6X的就1 buffer+5 核酸,但是加少了可能沉不下去就飘出来了
多了无所谓
2楼2009-01-03 21:19:29
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changes

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2009-1-3 21:19:
1、增加样品比重,提高沉降率使得核酸能够沉进孔里
2、含有电泳指示剂,如溴酚蓝、二甲苯青等
3、还有一些含有SDS,能够中止酶促反应,加了之后可以灭活酶然后电泳回收核酸

多没关系,少就有关系
比如6X的就 ...

多了也有关系的,会造成背景强,二甲基苯兰的影响还是有的。六倍的就1:5混合上样呗。
3楼2009-01-03 23:12:56
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
Originally posted by changes at 2009/1/3, 23:12:

多了也有关系的,会造成背景强,二甲基苯兰的影响还是有的。六倍的就1:5混合上样呗。

我用后染法没发现染料增强背景的现象
跑胶回收一次load很多也不会~~
4楼2009-01-04 00:28:58
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zqt123_1981

木虫 (小有名气)

我的PCR体系是20ul,完了加2ul 6x的loading buffer可以吧,
5楼2009-01-04 10:14:10
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

2ul 6x
10ul 样品

反正就是按照1:5加就对了
loading buffer宁多勿少

……为何不理解6X的意思呢?
6X就是1X(工作浓度)的6倍啊
6楼2009-01-04 10:52:00
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月月大可

木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by zqt123_1981 at 2009-1-4 10:14:
我的PCR体系是20ul,完了加2ul 6x的loading buffer可以吧,

太少了,你加的量只有1/11,6X指的是loading buffer含量为1/6,实际操作中都要求多于这个量,不然容易再加样时样品发飘,特别是电泳液用的次数较多,密度变大,更容易发飘。

[ Last edited by 月月大可 on 2009-1-4 at 15:35 ]
7楼2009-01-04 15:33:22
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