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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » loading buffer 的作用
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zqt123_1981

木虫 (小有名气)

[交流] loading buffer 的作用

我想知道在做PCR电泳时加loading buffer 的作用是什么？多点少点有没有影响

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-23 at 13:22 ]
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1楼 2009-01-03 20:08:52
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
350784478(金币+2,VIP+0): 10-23 13:22
1、增加样品比重，提高沉降率使得核酸能够沉进孔里
2、含有电泳指示剂，如溴酚蓝、二甲苯青等
3、还有一些含有SDS，能够中止酶促反应，加了之后可以灭活酶然后电泳回收核酸

多没关系，少就有关系
比如6X的就1 buffer+5 核酸，但是加少了可能沉不下去就飘出来了
多了无所谓
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2楼2009-01-03 21:19:29
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changes

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2009-1-3 21:19:
1、增加样品比重，提高沉降率使得核酸能够沉进孔里
2、含有电泳指示剂，如溴酚蓝、二甲苯青等
3、还有一些含有SDS，能够中止酶促反应，加了之后可以灭活酶然后电泳回收核酸

多没关系，少就有关系
比如6X的就 ...

多了也有关系的，会造成背景强，二甲基苯兰的影响还是有的。六倍的就1：5混合上样呗。
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3楼2009-01-03 23:12:56
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by changes at 2009/1/3, 23:12:

多了也有关系的，会造成背景强，二甲基苯兰的影响还是有的。六倍的就1：5混合上样呗。

我用后染法没发现染料增强背景的现象
跑胶回收一次load很多也不会~~
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4楼2009-01-04 00:28:58
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zqt123_1981

木虫 (小有名气)
我的PCR体系是20ul,完了加2ul 6x的loading buffer可以吧，
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5楼2009-01-04 10:14:10
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
2ul 6x
10ul 样品

反正就是按照1：5加就对了
loading buffer宁多勿少

……为何不理解6X的意思呢？
6X就是1X（工作浓度）的6倍啊
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6楼2009-01-04 10:52:00
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月月大可

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by zqt123_1981 at 2009-1-4 10:14:
我的PCR体系是20ul,完了加2ul 6x的loading buffer可以吧，

太少了，你加的量只有1/11,6X指的是loading buffer含量为1/6，实际操作中都要求多于这个量，不然容易再加样时样品发飘，特别是电泳液用的次数较多，密度变大，更容易发飘。

[ Last edited by 月月大可 on 2009-1-4 at 15:35 ]
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7楼2009-01-04 15:33:22
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