应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » T4连接的问题
51/1返回列表
查看: 2000  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

c8899747

新虫 (初入文坛)

[求助] T4连接的问题 已有1人参与

有A、B两个目的片段，A大小400bp，B大小1700bp，两个目的片段同时扩大，回收，T4处理，并同时连接3个不同载体，连接时间22度4h或16度过夜。挑斑检测，A阳性率90%,B阳性率0%，排除目的片段有问题的可能，请问哪里出了问题？

@wizardfan @biostar2009 发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2017-04-11 23:41:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
增加B的使用量，提高5 - 10倍。
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

c8899747 c8899747
2楼2017-04-13 12:00:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

c8899747

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2017-04-13 12:00:45
增加B的使用量，提高5 - 10倍。

谢谢你的解答，按照你所说的，如果我的B的量加少了，挑斑用两头通用引物检测会出现空载吗？因为我检测B的时候发现全部都是空载的片段大小，也就是B没有连上，然后载体发生自连了，可以这样解释吗，载体是用CpoI和NotI酶切的

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
3楼2017-04-14 15:39:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

c8899747

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2017-04-13 12:00:45
增加B的使用量，提高5 - 10倍。

或者说可以挑出来，但是阳性率非常低

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
4楼2017-04-14 15:40:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
3楼: Originally posted by c8899747 at 2017-04-14 15:39:38
谢谢你的解答，按照你所说的，如果我的B的量加少了，挑斑用两头通用引物检测会出现空载吗？因为我检测B的时候发现全部都是空载的片段大小，也就是B没有连上，然后载体发生自连了，可以这样解释吗，载体是用CpoI和N ...

无论用什么酶双酶切都可能在细菌中自连接。
赞一下 回复此楼
5楼2017-04-14 16:44:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 c8899747 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 284求调剂 +8 天下熯 2026-02-28 8/400 2026-03-02 00:15 by 暮雨星晴
[考研] 材料复试调剂 +3 学材料的点 2026-03-01 4/200 2026-03-02 00:07 by ccp273206157
[考研] 求调剂 +5 yunziaaaaa 2026-03-01 6/300 2026-03-01 23:57 by ccp273206157
[考研] 江苏省农科院招调剂1名 +3 Qwertyuop 2026-03-01 3/150 2026-03-01 23:18 by aaadim
[考研] 0856调剂 +5 刘梦微 2026-02-28 5/250 2026-03-01 22:30 by wang_dand
[考研] 材料类求调剂 +10 wana_kiko 2026-02-28 12/600 2026-03-01 22:10 by 海嵙Y
[考研] 26考研报考西工大材料308分求调剂 +3 weizhong123 2026-03-01 3/150 2026-03-01 21:42 by 公瑾逍遥
[考研] 272求调剂 +6 田智友 2026-02-28 6/300 2026-03-01 21:40 by 公瑾逍遥
[考研] 274求调剂 +3 cgyzqwn 2026-03-01 6/300 2026-03-01 21:24 by cgyzqwn
[考研] 0805总分292，求调剂 +7 幻想之殇 2026-03-01 7/350 2026-03-01 21:22 by 公瑾逍遥
[考研] 化工299分求调剂 一志愿985落榜 +5 嘻嘻(*^ω^*) 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:47 by 无际的草原
[考研] 291分工科求调剂 +9 science饿饿 2026-03-01 10/500 2026-03-01 18:55 by 18137688336
[考研] 295求调剂 +7 19171856320 2026-02-28 7/350 2026-03-01 18:54 by 18137688336
[考研] 0857调剂 +3 一ll半 2026-02-28 3/150 2026-03-01 18:32 by 热情沙漠
[考研] 328求调剂 +3 aaadim 2026-03-01 5/250 2026-03-01 17:29 by njzyff
[考研] 304求调剂 +6 曼殊2266 2026-02-28 7/350 2026-03-01 15:14 by wjLi2017
[考研] 311求调剂 +9 南迦720 2026-02-28 10/500 2026-03-01 10:55 by sunny81
[论文投稿] 求助coordination chemistry reviews 的写作模板 10+3 ljplijiapeng 2026-02-27 4/200 2026-03-01 09:07 by babero
[基金申请] 面上模板改不了页边距吧？ +5 ieewxg 2026-02-25 6/300 2026-03-01 00:10 by addressing
[考研] 276求调剂 +3 路lyh123 2026-02-28 4/200 2026-02-28 19:45 by 路lyh123
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭