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hychenxm

木虫 (小有名气)

[交流] 求助蛋白质电泳问题,谢谢!

我用12%的分离胶做蛋白电泳,为什么溴酚兰跑到下面了,可是蛋白Marker和样品的蛋白带只在胶的上一半分布。请哪位高手指点,非常感谢!
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gr0613

铁虫 (初入文坛)

★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~欢迎常来~
根据我的经验,百分之九十以上,我敢断定是试剂的问题,而且很大可能是分离胶Tirs的问题.(丙烯酰胺的可能性也是有的,但是不大)
对楼上的意见不同,原因如下:
一:有marker,说明不是蛋白变性不充分的问题,再不充分也会有小分子量的蛋白出来.
二:水压没有压好的结果只能是条带跑出来弯曲,而不是跑不出来.
溴酚兰跑出来大约在6KD左右,你之所以出现这种情况是由于Tris分离胶没有配好,导致条带拉不开.再跑下去的话就能拉开,但是问题是,溴酚兰跑出去了,你又不知判断何时该停下来.应该出在分离胶PH的问题上.建议重配分离胶.与前批次分离胶样品做一个对照.
4楼2009-01-02 22:12:18
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疯狂修行者

木虫 (正式写手)

★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~欢迎常来~
我以前跑胶也出现过这种情况,我觉得可能是胶没有充分的凝好或是灌完分离胶后加水时过快或用力不匀导致胶面不平,这些主要是我个人看法你下次做的时候注意点看看有没有效果
戒骄戒躁,坦荡做人,平常心做事,享受生活之美!!
2楼2009-01-02 12:53:00
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mwgyanchu

铁杆木虫 (著名写手)

你的蛋白多大的,Marker范围呢?感觉是不是上样前变性不充分?
3楼2009-01-02 17:04:03
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