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边木殇

木虫 (小有名气)

[求助] 求细菌包被96孔板方法 已有2人参与

最近在做毛滴虫和支原体的表面抗原与抗体筛选实验,用的全细胞10^6每孔,50nM NaHCO3缓冲液 4度过夜包被96板,之后步骤跟indirect ELISA 一样。但是结果OD值很低,怀疑细胞没有包被到板子上,或者中间洗板的时候掉了很多。所以想求个细菌全细胞 ELISA 实验方法!!!
ps. 最好不是超声裂解细胞提碎片蛋白的方法,只要细胞表面蛋白做抗原, 所以尽量保持细胞完整性最好
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yyy0305

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

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边木殇: 金币+150, 有帮助, 你做的是动物细胞吗?还是癌细胞? 2017-07-26 08:22:35
你这个是包被蛋白的套路,我做了些cell-based ELISA,一般是用培养基种板10^5个过夜,第二天细胞贴壁后拿4%的多聚甲醛固定,封闭后加入一抗二抗进行。通过显微镜可以时刻观察在各个实验过程中细胞是否贴在板子上。不太了解你的毛滴虫和支原体的情况,仅供参考。
4楼2017-07-25 09:18:03
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边木殇

木虫 (小有名气)

自己顶下,哪位好心人能帮我一下
2楼2017-04-17 08:37:42
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言蹊0731

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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边木殇: 金币+100, 有帮助, 你的意思把包被液去掉然后60度烘干吧,蛋白质在这个条件下会变形吗? 2017-07-25 08:33:23
抗原分可溶性和不可溶性的,把包被过的板子放60度烘箱,烘干试试,大约需要4小时左右
3楼2017-07-25 00:42:19
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yyy0305

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by yyy0305 at 2017-07-25 09:18:03
你这个是包被蛋白的套路,我做了些cell-based ELISA,一般是用培养基种板10^5个过夜,第二天细胞贴壁后拿4%的多聚甲醛固定,封闭后加入一抗二抗进行。通过显微镜可以时刻观察在各个实验过程中细胞是否贴在板子上。不 ...

是肿瘤细胞
5楼2017-07-26 09:08:44
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