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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR之后电泳检测一个条带也没有，急……
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angelinalulu

铜虫 (初入文坛)

[交流] PCR之后电泳检测一个条带也没有，急……

求助啊！！！
做植物PAPD
PCR之后电泳检测一个条带也没有，急……
94 ℃预变性8 min，变性94 ℃，1 min；退火38 ℃，1 min；延伸72 ℃，1.5 min
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1楼 2008-12-31 09:15:41
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cjl2008bio

铜虫 (初入文坛)
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~
变性跟退火35秒够了吧 ，延伸的话1分钟应该也够了。
其实条件不是主要的，关键是taq酶的活性和缓冲体系，换管新的酶和缓冲液试试看，不行在考虑引物和模板的原因
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2楼2008-12-31 10:31:49
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angelinalulu

铜虫 (初入文坛)
谢谢！我再试试！有问题再请教
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3楼2008-12-31 10:48:09
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llzzll2001

金虫 (初入文坛)
先排除电泳问题。如果MARKER也没条带那就有可能是电泳的问题了
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4楼2008-12-31 17:22:09
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angelinalulu

铜虫 (初入文坛)
电泳没有问题
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5楼2009-01-01 09:40:13
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xue0510

新虫 (初入文坛)
换好的酶
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6楼2009-06-21 11:20:54
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fleugen

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你这退火温度也太低了吧，一般都55度左右，个人意见
还有PCR这个东西很讲不清的，我曾经就是同样的条件、同样的体系，有的时候P能P出来，有的时候死活就是P不出来
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7楼2009-06-22 15:36:15
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350784478

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你可以先跑个梯度PCR，摸索比较好的温度，然后再做，那样子比较好一些。
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朝为田舍郎，暮登天子堂。将相本无种，男儿当自强。
8楼2009-06-22 16:18:10
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dyyyyy

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
原因很多，有时候甚至引物储存时间过长都会p不出来。另外，模版是否纯也很重要，不行就纯化一下吧。
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9楼2009-06-22 16:43:43
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zqt123_1981

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你是做的RAPD吧 ？随机引物肯定有的引物会p不出带来
我也在做 。。。。个人经验。。。。
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10楼2009-06-22 21:15:54
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