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angelinalulu

铜虫 (初入文坛)

[交流] PCR之后电泳检测一个条带也没有,急……

求助啊!!!
做植物PAPD
PCR之后电泳检测一个条带也没有,急……
94 ℃预变性8 min,变性94 ℃,1 min;退火38 ℃,1 min;延伸72 ℃,1.5 min
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cjl2008bio

铜虫 (初入文坛)


lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~
变性跟退火35秒够了吧 ,延伸的话1分钟应该也够了。
其实条件不是主要的,关键是taq酶的活性和缓冲体系,换管新的酶和缓冲液试试看,不行在考虑引物和模板的原因
2楼2008-12-31 10:31:49
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angelinalulu

铜虫 (初入文坛)

谢谢!我再试试!有问题再请教
3楼2008-12-31 10:48:09
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llzzll2001

金虫 (初入文坛)

先排除电泳问题。如果MARKER也没条带那就有可能是电泳的问题了
4楼2008-12-31 17:22:09
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angelinalulu

铜虫 (初入文坛)

电泳没有问题
5楼2009-01-01 09:40:13
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xue0510

新虫 (初入文坛)

换好的酶
6楼2009-06-21 11:20:54
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fleugen


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你这退火温度也太低了吧,一般都55度左右,个人意见
还有PCR这个东西很讲不清的,我曾经就是同样的条件、同样的体系,有的时候P能P出来,有的时候死活就是P不出来
7楼2009-06-22 15:36:15
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350784478

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你可以先跑个梯度PCR,摸索比较好的温度,然后再做,那样子比较好一些。
朝为田舍郎,暮登天子堂。将相本无种,男儿当自强。
8楼2009-06-22 16:18:10
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dyyyyy

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
原因很多,有时候甚至引物储存时间过长都会p不出来。另外,模版是否纯也很重要,不行就纯化一下吧。
9楼2009-06-22 16:43:43
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zqt123_1981

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你是做的RAPD吧 ?随机引物肯定有的引物会p不出带来
我也在做 。。。。个人经验。。。。
10楼2009-06-22 21:15:54
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