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erictan2046

铜虫 (正式写手)

[交流] [求助] 何谓PCR的终浓度?

问题:

(1)何谓PCR的终浓度?是怎么计算的?
PCR的反应体系与反应条件:

10x PCR buffer 10ul
4种dNTP 混合液 各 200umol/L
引物 各10~100pmol
模板 DNA 0.1~2ug
Taq DNA 聚合酶 2.5U
Mg2+ 1.5mmol/L
ddH20 至 100uL

是不是PCR的反应体系是咱们自己设定的???一定要到100ul那么多吗?还有各个参数是什么计算出来要加多少uL的???

终浓度又是什么?
希望各路高手帮忙和能得到满意的答复!谢谢
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cjl2008bio

铜虫 (初入文坛)

打错了  反应体系25微升
4楼2009-01-01 11:29:57
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查看全部 4 个回答

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

网上的很多资料很误导的
第一次就扩100ul,万一挂了很浪费试剂
终浓度就是各组分在最后混好的100ul或者50ul之类的最终浓度
比如25mM的Mgcl2溶液,加1ul,最后在最终体积为100ul的反应体系中,就是终浓度为0.25mM了。当然实际上PCR对Mg的浓度要求远高于此

建议你看看教科书吧~~都有的
还有Taq酶的说明书
2楼2008-12-30 23:12:12
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cjl2008bio

铜虫 (初入文坛)

你买的taq酶肯定都带有10倍浓度缓冲液的吧,里面有的自动含有镁离子,有的额外加一管专门的镁离子溶液,按照其指示的浓度倍数配到1倍浓度就行。taq酶加1u或者0.5u其实都可以有很好的效果,反应体系25ml。
3楼2008-12-31 10:40:53
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