| 查看: 23393 | 回复: 34 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
求助诸君，新手TRIzol法提取RNA，RNA浓度太低，纯度也太低，怎么破 已有4人参与
|
||
|
步骤： 1、细胞或组织加 Trizol 后，室温放置 5min，使其充分裂解。 2、12,000rpm 离心 10min，弃沉淀。 3、按 200ul 氯仿/ml Trizol 加入氯仿，上下颠倒混匀后常温放置15min。 4、4℃ 12,000g 离心 15min。 5、吸取上层水相，至另一离心管中 6、按 0.5ml 异丙醇/ml Trizol 加入异丙醇混匀，室温放置10min。 7、4℃ 12,000g 离心 10min，弃上清，RNA 沉于管底。 8、按 1ml 75%乙醇/ml Trizol 加入 75%乙醇，温和振荡离心管，悬浮沉淀。（先加无酶水再加乙醇配置而成，会不会有问题？） 9、 4℃ 8,000g 离心 5min，尽量弃上清。 10、室温晾干或真空干燥 5-10min。注：RNA 样品不要过于干燥，否则很难溶解。 11、用 10ul DEPC水溶解RNA样品。 其中我最后一步用10ul的DEPC水溶解，得到的RNA浓度才90多点ng/ul 浓度也不高，求助诸君啊啊啊  E0F478D859AE9A00BB4343FCC9FF71EF.jpg  E8B6ACCA6880FBD84EC6478AE9E3EE9A.jpg@biostar2009@飞约疯人院@wizardfan@youlinglyw |
回复此楼» 猜你喜欢
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？
已经有0人回复
-
His标签蛋白纯化怎么才能快？
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有185人回复
-
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析
已经有0人回复
-
KRAS G12V(ON) 选择性抑制剂 RMC-5127：从三元复合物机制到科研应用
已经有0人回复
-
SHP2 变构抑制剂 Sitneprotafib：从作用机制到科研试剂选型要点
已经有0人回复
-
PRMT5·MTA 抑制剂 MRTX1719 的科研应用
已经有0人回复
-
SW033291 科研使用解析：分子特征、储存与实验获取要点
已经有0人回复
-
泛 RAS 抑制新思路：大环肽拟似物如何同时牵住突变型与野生型 RAS？
已经有0人回复
-
TYK2/JAK1 双靶点工具化合物 Brepocitinib：激酶选择性、研究进展与实验应用全解析
已经有0人回复
-
矢车菊素-3-O-葡萄糖苷质控实录：从一张HPLC图谱读懂纯度与稳定性
已经有0人回复
22楼2017-04-01 20:08:16
|
1.我除了离心以外都是常温操作，有没有问题？哪些是最好冰上操作？2.我后续又通过试剂盒纯化，但浓度变特别低，各位大佬用TRIzol提细菌RNA有没有纯化？3.我的步骤里面有没有哪个顺序不太合适或者时间不合适？ 发自小木虫IOS客户端 |
2楼2017-03-30 19:55:23
4楼2017-03-30 20:51:57
liyuan110188
新虫 (初入文坛)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 559.8
- 散金: 10
- 帖子: 46
- 在线: 10.8小时
- 虫号: 4510447
- 注册: 2016-03-16
- 专业: 细胞生物学
5楼2017-03-30 20:52:13