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蛋白质的分离纯化 已有1人参与
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第一次做蛋白分离纯化，请问在目的蛋白N段加个His-Tag，应该怎么做？ 应该加在启动子后(起始密码子前)吗？或者如果加在C端，就是终止密码子后(终止子前)吗？ 发自小木虫Android客户端 |
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medi812
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【答案】应助回帖
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鸿鹄00000: 金币+2, ★★★很有帮助 2017-03-30 08:47:48
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补充一下 his的纯化纯度不高 要么你必须加大你目标蛋白的表达 要么你下游换了buffer之后再做离子交换 发自小木虫IOS客户端 |
3楼2017-03-30 00:52:28
medi812
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N端要在met后面，可以直接连也可以加个linker 要是放在c端要放在终止密码前面 放后面就不表达了 pET系统里面可以有很多选择的 看看你目标蛋白哪一边比较重要 tag就放在不太重要那边 最好纯化后切掉 选个酶切位点放在tag和蛋白中间 发自小木虫IOS客户端 |
2楼2017-03-30 00:51:25