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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 用了高保真酶如何在PCR产物后加A ? 连在T载体上
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卡拉

新虫 (初入文坛)

[交流] 用了高保真酶如何在PCR产物后加A ? 连在T载体上

我用了不再不在PCR产物后加A 的Pfu 高保真酶  我该怎么让他加上A  ? 让他连在T 载体上啊? 在这里先谢谢大家
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1楼 2008-12-30 14:27:35
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卡拉

新虫 (初入文坛)
谢谢大家的帮助 我好像没有 dATP   直接加 Taq mix  不知道 行不行?
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6楼2008-12-31 21:38:15
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朱静华

铜虫 (初入文坛)
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~
有加A反应液，连接前做个加A反应就可以了
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2楼2008-12-30 15:26:38
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jasco

木虫 (正式写手)
用普通taq，72度30min，即可
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4楼2008-12-30 16:46:38
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广州东盛

★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~
由高保真DNA 聚合酶（如Pfu）产生的PCR 片段的纯化产物1-7ul
    加入1ul Taq DNA 聚合酶10×反应缓冲液（含MgCl2）；
    加入dATP 至终浓度0.2 mM；
    加入5 U的Taq DNA 聚合酶；
    加超纯水至终反应体积为10ul；
    70℃孵育15-30 分钟；
    进行TA克隆。
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5楼2008-12-30 17:27:28
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