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小白vs悠言

铜虫 (小有名气)

应助: 1 (幼儿园)
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虫号: 3366611
注册: 2014-08-14
专业: 临床兽医学

[求助] 引物验证没有目的条带

引物验证跑琼脂糖凝胶电泳时目的基因基本上跑不出来，有的很弱，可是内参跑的很亮。引物是用Prime 5设计的，产物长度在80-200bp之间。
反应体系是       模板                                  1微升
                     2× Taq PCR Master Mix    12.5微升
                  上游引物                               1微升
                  下游引物                               1微升
                  ddH2O                                     9.5微升
               总体系                                           25微升
PCR循环程序是预热  94℃ 3min
                        30个循环:  变性  94℃ 30sec 退火 50℃ 30sec       延伸 72℃ 1min
                           72℃ 5min
                           4℃ 保温
退火温度之前设置的是55℃，没有跑出来目的条带，就降到50℃了。
下面这张图是按照上面的体系跑出来的
希望各位大神帮忙看看什么问题  谢谢谢谢。。。。

633327464417795294.jpg

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1楼 2017-03-28 15:18:29

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