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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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erictan2046

铜虫 (正式写手)

[交流] [求助] PCR的条带P出来不亮?

本人遇到的问题:

(1)本人在实验当中遇到PCR反应P出来的条带都不是很亮,除了第一次PCR的条带有稍微亮一些的!PCR 10x PCR buffer含(Mg2+)的,起初加进去能跑出很亮的条带,由于把那小瓶含Mg离子的buffer 用完了,当单独加入了MgCl2 PCR的时候,现在我PCR的条带就不亮了!Mg2+优化条件,有哪位高手能帮忙一下提供资料?

(2)Takara宝生物的Taq聚合酶高保真的怎么稀释???听师姐说酶的母液都需要稀释的!

以上2个问题希望能得到各路高手的帮忙得到满意的解答。
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cjl2008bio

铜虫 (初入文坛)

酶实在要稀释的话用TE稀释,工作浓度就可以
7楼2008-12-31 10:43:29
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j2

木虫 (正式写手)


lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~
Taq DNA聚合酶是Mg2+依赖性酶,该酶的催化活性对Mg2+浓度变化非常敏感,Mg2+浓度过低时,酶的活力显著降低,但过高又会催化非特异性扩增,适当浓度的MgCl2能使Taq DNA聚合酶的催化活性提高50~60%,其最适浓度为50mmol/L,高于75mmol/L时明显抑制该酶的活性。
我跟你相反,单独加MgCl2的出来了……
修炼ing,当虫仙……
2楼2008-12-30 10:48:23
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~
1、每一种Taq酶对Mg的浓度依赖性不同。一般以2.5mM为start point,以0.5mM为梯度上下摸
2、Taq酶不要稀释,这是错误的做法,稀释之后酶很容易失活
3、为何大家都要用takara的东西呢……太垃圾了……Promega、Invitrogen的酶都比这个好用太多倍了,扩增能力根本就不是一个档次的。用takara的东西做不出实验是很常见的
3楼2008-12-30 13:31:07
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jasco

木虫 (正式写手)

[quote]Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2008-12-30 13:31:
1、每一种Taq酶对Mg的浓度依赖性不同。一般以2.5mM为start point,以0.5mM为梯度上下摸
2、Taq酶不要稀释,这是错误的做法,稀释之后酶很容易失活
3、为何大家都要用takara的东西呢……太垃圾了……Promega、In ... [/quote

竟然还有同学稀释酶来用,FT
我也不喜欢takara的酶,稍微困难点的pcr他就不行了
4楼2008-12-30 16:58:10
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