应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » [求助] PCR的条带P出来不亮？
51/1返回列表
查看: 1014  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

erictan2046

铜虫 (正式写手)

[交流] [求助] PCR的条带P出来不亮？

本人遇到的问题：

（1）本人在实验当中遇到PCR反应P出来的条带都不是很亮，除了第一次PCR的条带有稍微亮一些的！PCR 10x PCR buffer含（Mg2+）的，起初加进去能跑出很亮的条带，由于把那小瓶含Mg离子的buffer 用完了，当单独加入了MgCl2 PCR的时候，现在我PCR的条带就不亮了！Mg2+优化条件，有哪位高手能帮忙一下提供资料？

（2）Takara宝生物的Taq聚合酶高保真的怎么稀释？？？听师姐说酶的母液都需要稀释的！

以上2个问题希望能得到各路高手的帮忙得到满意的解答。
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2008-12-30 10:27:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
==b
广告……
普通PCR，用Promega的GoTaq，我还没遇到做不出来的实验
需要一点点保真度的，考虑用混合酶，或者修饰的酶
要很高保真度的，就上PfuUltra II吧……
赞一下 回复此楼
6楼2008-12-30 18:12:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

j2

木虫 (正式写手)
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~
Taq DNA聚合酶是Mg2+依赖性酶，该酶的催化活性对Mg2+浓度变化非常敏感，Mg2+浓度过低时，酶的活力显著降低，但过高又会催化非特异性扩增，适当浓度的MgCl2能使Taq DNA聚合酶的催化活性提高50～60%，其最适浓度为50mmol/L，高于75mmol/L时明显抑制该酶的活性。
我跟你相反，单独加MgCl2的出来了……
赞一下(10人) 回复此楼
修炼ｉｎｇ，当虫仙……
2楼2008-12-30 10:48:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~
1、每一种Taq酶对Mg的浓度依赖性不同。一般以2.5mM为start point，以0.5mM为梯度上下摸
2、Taq酶不要稀释，这是错误的做法，稀释之后酶很容易失活
3、为何大家都要用takara的东西呢……太垃圾了……Promega、Invitrogen的酶都比这个好用太多倍了，扩增能力根本就不是一个档次的。用takara的东西做不出实验是很常见的
赞一下(10人) 回复此楼
3楼2008-12-30 13:31:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jasco

木虫 (正式写手)
[quote]Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2008-12-30 13:31:
1、每一种Taq酶对Mg的浓度依赖性不同。一般以2.5mM为start point，以0.5mM为梯度上下摸
2、Taq酶不要稀释，这是错误的做法，稀释之后酶很容易失活
3、为何大家都要用takara的东西呢……太垃圾了……Promega、In ... [/quote

竟然还有同学稀释酶来用，FT
我也不喜欢takara的酶，稍微困难点的pcr他就不行了
赞一下 回复此楼
4楼2008-12-30 16:58:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +8 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 9/450 2026-11-13 11:11 by Equinoxhua
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 TgvkbZZl9tqB 2026-11-11 6/300 2026-11-12 12:42 by ECLTXnJnRSXf
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-11 5/250 2026-11-12 11:44 by HajghKOMynmz
[基金申请] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 7/350 2026-11-12 11:33 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 4/200 2026-11-12 11:22 by HajghKOMynmz
[教师之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 5/250 2026-11-12 11:14 by HajghKOMynmz
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 czAiolzR0IJC 2026-11-10 7/350 2026-11-12 11:11 by HajghKOMynmz
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 6/300 2026-11-12 10:49 by HajghKOMynmz
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 6/300 2026-11-12 10:16 by HajghKOMynmz
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +7 FChKX8meu1ds 2026-11-09 9/450 2026-11-12 10:03 by HajghKOMynmz
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +6 FChKX8meu1ds 2026-11-09 11/550 2026-11-12 09:57 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 czAiolzR0IJC 2026-11-10 5/250 2026-11-12 06:25 by 9fOTqj074tIg
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 YHiw1gou1Eda 2026-11-10 7/350 2026-11-12 05:39 by 9fOTqj074tIg
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 FChKX8meu1ds 2026-11-09 8/400 2026-11-12 05:30 by 9fOTqj074tIg
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 FChKX8meu1ds 2026-11-09 7/350 2026-11-12 05:30 by 9fOTqj074tIg
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 8/400 2026-11-12 04:57 by 9fOTqj074tIg
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 9/450 2026-11-12 04:57 by 9fOTqj074tIg
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +6 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 7/350 2026-11-12 00:44 by 9fOTqj074tIg
[文学芳草园] 厉娜 +3 张丹枫1991 2026-11-09 5/250 2026-11-09 16:53 by 张丹枫1991
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 9/450 2026-11-08 22:46 by l48hFd8Nwae2
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭