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小李纸11

银虫 (正式写手)

[求助] 酵母电转后长出奇怪的菌落。。。 已有3人参与

最近在用毕赤酵母表达外源蛋白,电转后估计是涂的太浓了,完全没有单菌落,直接是白色的一厚层,越长越厚,并有浓烈的酒味,按理来说该是酵母啊,,,因为没办法挑单菌落,就直接用牙签刮了一层到加了抗菌筛选剂的液体培养基,培养两天后用这个菌液经过离心,加水煮冻煮冻后做了PCR,用特异性引物也能P出目的条带来,然后就用这个菌液又划了有抗生素的平板,但过了一晚就长出了菌落,而且明显不是酵母菌,菌落发黄,还有些透明,像大肠杆菌似的,,,怎么回事啊。。。我该怎么处理才能筛出酵母呢?
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小冀-

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【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可能是菌落不纯,重新调单菌落吧~还有就是电转之后会长这么多菌吗?不会电转的时候就已经染菌了吧
···
2楼2017-03-28 12:00:05
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小李纸11

银虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 小冀- at 2017-03-28 12:00:05
可能是菌落不纯,重新调单菌落吧~还有就是电转之后会长这么多菌吗?不会电转的时候就已经染菌了吧

关键是完全没有单菌落啊,直接一厚层,实在是涂太多了,,,不知道什么时候染的菌,但是有很浓的酒味,感觉就算是染菌也该有酵母在里面才对啊,,,为什么划了平板没长出一个像酵母的菌落呢。。。
3楼2017-03-28 12:05:50
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小冀-

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引用回帖:
3楼: Originally posted by 小李纸11 at 2017-03-28 12:05:50
关键是完全没有单菌落啊,直接一厚层,实在是涂太多了,,,不知道什么时候染的菌,但是有很浓的酒味,感觉就算是染菌也该有酵母在里面才对啊,,,为什么划了平板没长出一个像酵母的菌落呢。。。...

可能杂菌比例太高了也说不定~而且电转的时候大部分的菌应该都被电死了吧,长了那么多肯定有问题的
···
4楼2017-03-28 14:33:39
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virty76

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
菌苔厚厚,应该是产荚膜的细菌吧
5楼2017-03-28 16:27:30
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小李纸11

银虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by virty76 at 2017-03-28 16:27:30
菌苔厚厚,应该是产荚膜的细菌吧

把那个菌刮了一些在加了抗生素的培养基里养起来后用显微镜看了,普通的光学显微镜,能看到两个两个长在一起的圆形的菌,感觉应该是酵母啊。。。
6楼2017-03-29 19:05:39
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小李纸11

银虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 小冀- at 2017-03-28 14:33:39
可能杂菌比例太高了也说不定~而且电转的时候大部分的菌应该都被电死了吧,长了那么多肯定有问题的...

把那个菌刮了一些在加了抗生素的培养基里养起来后用显微镜看了,普通的光学显微镜,能看到两个两个长在一起的圆形的菌,感觉应该是酵母啊。。。
7楼2017-03-29 19:06:10
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小冀-

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引用回帖:
7楼: Originally posted by 小李纸11 at 2017-03-29 19:06:10
把那个菌刮了一些在加了抗生素的培养基里养起来后用显微镜看了,普通的光学显微镜,能看到两个两个长在一起的圆形的菌,感觉应该是酵母啊。。。...

应该是对的
···
8楼2017-03-29 19:10:01
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瘸腿猎豹

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我建议遇到这种情况可以用灭菌牙签稀释1000倍之后重新涂在筛选培养基,这样会好很多。
时间可以改变一切!
9楼2017-05-06 18:40:35
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贪恋尘世

新虫 (正式写手)

我跟楼主遇到一样的情况,请问您的问题解决了吗

发自小木虫IOS客户端
10楼2017-10-07 20:39:26
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