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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 肠道菌群的冻存及复苏
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洛ye清寒

金虫 (小有名气)

[求助] 肠道菌群的冻存及复苏 已有1人参与

求助肠道菌群的冻存和复苏！

自己提取的肠道菌群，加入了20%的甘油，直接放在-80℃冰箱冻存，复苏的时候37℃水浴溶解加在培养基中温孵24h，发现菌并没有长起来，而且也没有活力了~到底问题出在哪里

不知道是不是我的步骤出现了问题。大部分问的是细胞的冻存和复苏，没有看到细菌，特别是厌氧菌的冻存和复苏，实验室也没有人做过，请问大家，冻存的时候也要像细胞一样慢冻吗？复苏的时候，37℃水浴快融，加培基的比例一般是多少，需要离心除掉含有甘油的液体培养基吗？
复苏之后的细菌我温孵了24小时之后再进行实验。需要保持严格的厌氧条件吗？…
或者有人有这方面的经验吗？谢谢大家！

@天使托 发自小木虫Android客户端
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1楼 2017-03-27 18:38:45
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gfenjy

新虫 (小有名气)
肠道菌一般属于兼氧或者厌氧吧

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2楼2017-03-27 20:38:57
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微基生物

捐助贵宾 (小有名气)

技术专员

【答案】应助回帖

肠道中90%以上是厌氧微生物，并且不同的微生物所需要的培养基不同。
我们公司已开展肠道菌群的培养服务，是在厌氧和微氧环境中培养的肠道菌群，已经测试了39种培养基。与高通量测序结果相比，可以检测出高通量结果的70-80%微生物。
建议你查一下相关文献，另外厌氧环境是必须的。
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专注微生物多样性分析QQ2758452825
3楼2017-05-03 10:04:31
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微君

铜虫 (小有名气)
以上说法不敢苟同！据我所知，肠道菌大多为好氧与兼性厌氧，如大肠菌群；非要说有厌氧，那也是乳酸菌一类，而且这也是微氧居多。说正题，楼主冻存用冻存盒了吗？没有的话，直接放-80是会冻死的，要梯度降温;还有你没有说明甘油终浓度多少，即混合比例多少，一般是终浓度10-20。冻存用慢冻速融没毛病。

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4楼2017-05-04 01:54:51
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