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洛ye清寒金虫 (小有名气)
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[求助]
肠道菌群的冻存及复苏 已有1人参与
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求助肠道菌群的冻存和复苏！ 自己提取的肠道菌群，加入了20%的甘油，直接放在-80℃冰箱冻存，复苏的时候37℃水浴溶解加在培养基中温孵24h，发现菌并没有长起来，而且也没有活力了~到底问题出在哪里 不知道是不是我的步骤出现了问题。大部分问的是细胞的冻存和复苏，没有看到细菌，特别是厌氧菌的冻存和复苏，实验室也没有人做过，请问大家，冻存的时候也要像细胞一样慢冻吗？复苏的时候，37℃水浴快融，加培基的比例一般是多少，需要离心除掉含有甘油的液体培养基吗？ 复苏之后的细菌我温孵了24小时之后再进行实验。需要保持严格的厌氧条件吗？… 或者有人有这方面的经验吗？谢谢大家！ @天使托 发自小木虫Android客户端 |
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以上说法不敢苟同！据我所知，肠道菌大多为好氧与兼性厌氧，如大肠菌群；非要说有厌氧，那也是乳酸菌一类，而且这也是微氧居多。说正题，楼主冻存用冻存盒了吗？没有的话，直接放-80是会冻死的，要梯度降温;还有你没有说明甘油终浓度多少，即混合比例多少，一般是终浓度10-20。冻存用慢冻速融没毛病。 发自小木虫Android客户端 |
4楼2017-05-04 01:54:51