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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 定量PCR标准曲线低浓度未扩增，求疑
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xxxr630

新虫 (初入文坛)

[求助] 定量PCR标准曲线低浓度未扩增，求疑

小白做16S细菌qPCR标准曲线遇到问题，共做8个梯度，在前3个梯度是正常扩增，但是在后5个低浓度梯度根本没有扩增，都是10倍稀释，求指导
已经排除质粒因素，SYBR Green 1 酶扩增，反应程序为94℃ 5S,58℃ 15S，72℃ 10S，40个循环，机器是Roche的Lightcycler480

定量PCR标准曲线低浓度未扩增，求疑
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定量PCR标准曲线低浓度未扩增，求疑-1
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1楼 2017-03-27 16:09:22
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xxxr630

新虫 (初入文坛)
如图1所示，前3个梯度正常扩增，后5个未扩增，浓度为1.5E9至E2
图2，红色即是前3梯度，单峰正常，蓝色为后5个梯度，峰直接提前，看不懂什么意思
跪求大神指导
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2楼2017-03-27 16:14:49
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lihopcr

新虫 (初入文坛)
再做一遍，跑个胶看看

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3楼2017-04-05 08:17:46
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lihopcr

新虫 (初入文坛)
看溶解曲线，像是低浓度的被抑制了，但是1.5E6浓度也不低

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4楼2017-04-05 08:19:38
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daming_yj

铜虫 (小有名气)
楼主请问你的问题解决了么？我也出现了类似的情况
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5楼2018-08-08 11:42:08
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