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小笨123

新虫 (初入文坛)

[求助] pCR4-TOPO载体连接问题

本人PCR出来400bp以下片段,回收后连接pCR4-TOPO载体,22℃  30min ,16℃过夜都连接过,转化后怎么都不长菌。已知感受态没有问题,PCR回收产物条带也非常好,请问是怎么回事,怎么才能连上啊?求高手指点,载体较贵,不太敢浪费很多,已经连了七八次了。
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