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欢乐多小蜗牛

铁虫 (初入文坛)

[交流] 我家的蛋白到底怎么搞啊,急急急!

这是我们公司原料蛋白的氨基酸序列,采用E.coli 表达,获得包涵体然后进行稀释复性,可是复性效果一直不理想,万能的虫友伴我分析指导一下,将不胜感激!日后必有重谢!FNNFTVSFWLRVPKVSASHLEGSGSGGADDVVDSSKSFVMENFSSYHGTKPGYVDSIQKGIQKPKSGTQGNYDDDWKEFYSTDNKYDAAGYSVDNENPLSGKAGGVVKVTYPGLTKVLALKVDNAETIKKELGLSLTEPLMEQVGTEEFIKRFGDGASRVVLSLPFAEGSSSVEYINNWEQAKLSVELEINFETRGKRGQDAMYEYMAQACAGNRVRR

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[ Last edited by 欢乐多小蜗牛 on 2017-3-26 at 10:15 ]
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欢乐多小蜗牛

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by stevenshi021 at 2017-03-25 18:44:58
那就梯度透析,条件比较缓和试试

我们现在超滤代替透析,因为透析不适合工业生产。

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7楼2017-03-26 09:52:53
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欢乐多小蜗牛

铁虫 (初入文坛)

该蛋白前面21个氨基酸是破伤风毒素表位肽,中间一段link ~GSGSG~,后面是白喉毒素突变蛋白CRM197的A链

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2楼2017-03-25 14:33:00
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stevenshi021

新虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
欢乐多小蜗牛: 金币+10 2017-04-06 16:55:52
难,有多种方法,柱上复性; 瞬时稀释;梯度透析法。或者直接改变表达方法获得可溶性蛋白

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3楼2017-03-25 15:17:11
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欢乐多小蜗牛

铁虫 (初入文坛)

该蛋白只有一个巯基(C),电泳和HPLC结果表明:复性后有少量二聚体和大量6-8聚体形成,单体产量极少。而该蛋白用0.15M氯化钠溶液时貌似能解聚成单体。所以现在很迷惑我们复性是成功了还是需要继续摸索条件呢?
4楼2017-03-25 15:48:40
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