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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 我家的蛋白到底怎么搞啊，急急急！
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欢乐多小蜗牛

铁虫 (初入文坛)

[交流] 我家的蛋白到底怎么搞啊，急急急！

这是我们公司原料蛋白的氨基酸序列，采用E.coli 表达，获得包涵体然后进行稀释复性，可是复性效果一直不理想，万能的虫友伴我分析指导一下，将不胜感激！日后必有重谢！FNNFTVSFWLRVPKVSASHLEGSGSGGADDVVDSSKSFVMENFSSYHGTKPGYVDSIQKGIQKPKSGTQGNYDDDWKEFYSTDNKYDAAGYSVDNENPLSGKAGGVVKVTYPGLTKVLALKVDNAETIKKELGLSLTEPLMEQVGTEEFIKRFGDGASRVVLSLPFAEGSSSVEYINNWEQAKLSVELEINFETRGKRGQDAMYEYMAQACAGNRVRR

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[ Last edited by 欢乐多小蜗牛 on 2017-3-26 at 10:15 ]
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1楼 2017-03-25 14:30:43
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欢乐多小蜗牛

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by stevenshi021 at 2017-03-25 15:17:11
难，有多种方法，柱上复性; 瞬时稀释;梯度透析法。或者直接改变表达方法获得可溶性蛋白

我们领导的意思还是要通过稀释，超滤来复性，可是反复做，一直没起色
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5楼2017-03-25 15:52:45
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欢乐多小蜗牛

铁虫 (初入文坛)
该蛋白前面21个氨基酸是破伤风毒素表位肽，中间一段link ~GSGSG~，后面是白喉毒素突变蛋白CRM197的A链

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2楼2017-03-25 14:33:00
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stevenshi021

新虫 (小有名气)
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欢乐多小蜗牛: 金币+10 2017-04-06 16:55:52
难，有多种方法，柱上复性; 瞬时稀释;梯度透析法。或者直接改变表达方法获得可溶性蛋白

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3楼2017-03-25 15:17:11
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欢乐多小蜗牛

铁虫 (初入文坛)
该蛋白只有一个巯基（C），电泳和HPLC结果表明：复性后有少量二聚体和大量6-8聚体形成，单体产量极少。而该蛋白用0.15M氯化钠溶液时貌似能解聚成单体。所以现在很迷惑我们复性是成功了还是需要继续摸索条件呢?
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4楼2017-03-25 15:48:40
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stevenshi021

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
那就梯度透析，条件比较缓和试试

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6楼2017-03-25 18:44:58
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欢乐多小蜗牛

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by stevenshi021 at 2017-03-25 18:44:58
那就梯度透析，条件比较缓和试试

我们现在超滤代替透析，因为透析不适合工业生产。

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7楼2017-03-26 09:52:53
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stevenshi021

新虫 (小有名气)
这样啊ufdf

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8楼2017-03-26 11:31:00
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stevenshi021

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
超滤也不适合工业，买个ufdf膜包慢慢做换液速度慢点

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9楼2017-03-26 11:31:41
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欢乐多小蜗牛

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by stevenshi021 at 2017-03-26 11:31:41
超滤也不适合工业，买个ufdf膜包慢慢做换液速度慢点

你好，请教一下ufdf膜包是什么，哪里有卖，网上找不到。

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10楼2017-03-26 21:03:37
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