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游韩莉

铜虫 (初入文坛)


[交流] His原核诱导蛋白有两条带

最近原核诱导HIS标签蛋白大量表达,结果挺奇怪的。一抗为鼠来源,用一抗稀释液稀释了1000倍;二抗为辣根过氧化物酶山羊抗小鼠,用TBST稀释1000倍。可是最后发现蛋白出现了两条带,挺接近的。我的目的蛋白为39KD。跑完胶直接考马斯亮蓝也有两条大带,不知道原因是什么?请各位大神指点指点( ▼-▼ )。

His原核诱导蛋白有两条带
图片1.png
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绝对零度的笑

木虫 (正式写手)



游韩莉(金币+1): 谢谢参与
可能蛋白断掉了,或者你的蛋白内部有二硫键
16楼2017-03-24 23:13:13
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stevenshi021

新虫 (小有名气)


★ ★ ★ ★
游韩莉(金币+1): 谢谢参与
游韩莉: 金币+3 2017-03-27 14:42:02
看看蛋白是否发生断裂或者细胞内源蛋白加一个阴性对照看看

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18楼2017-03-25 15:20:02
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游韩莉

铜虫 (初入文坛)


引用回帖:
18楼: Originally posted by stevenshi021 at 2017-03-25 15:20:02
看看蛋白是否发生断裂或者细胞内源蛋白加一个阴性对照看看

你好!我是第一次提蛋白,请问怎么加一个阴性对照呢?
19楼2017-03-27 14:52:33
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stevenshi021

新虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
加一个不诱导的对照,看看有木有这个条带在你的wb上。看东西有没有锻炼纯化出来打质朴直接看分子量大小

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20楼2017-03-27 18:47:28
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wuhu0612331

铜虫 (正式写手)


21楼2017-03-28 00:45:23
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yuanye001

新虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你可以尝试跑个还原胶和非还原胶试试

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22楼2017-03-30 22:12:42
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yuanye001

新虫 (初入文坛)


或者把还原胶的DTT多加一点

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23楼2017-03-30 22:13:03
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xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你这个图做的也太烂了

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24楼2017-04-09 22:09:48
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用户晓晓

木虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
是不是这个蛋白会被剪切加工,从而剪去了部分序列,形成了一个小蛋白。比如有分泌型蛋白成熟后会剪去信号肽。   再或者是检查下阅读框有没有问题,有基因能编码多种蛋白,但是his标签也正确表达了,应该不会出现这种情况啊~

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26楼2018-06-01 09:46:34
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Crazy cat

铜虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
一般是蛋白1降解了一点或者断裂了一点

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27楼2018-06-04 12:37:44
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chen_xiao_xu

银虫 (正式写手)


28楼2018-06-04 16:49:52
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简单回复
2017-03-24 18:24   回复  
游韩莉(金币+1): 谢谢参与
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yuyuewen3楼
2017-03-24 18:35   回复  
游韩莉(金币+1): 谢谢参与
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tzynew4楼
2017-03-24 18:39   回复  
游韩莉(金币+1): 谢谢参与
skyish5楼
2017-03-24 18:40   回复  
游韩莉(金币+1): 谢谢参与
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2017-03-24 18:52   回复  
游韩莉(金币+1): 谢谢参与
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4189269167楼
2017-03-24 19:12   回复  
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2017-03-24 19:13   回复  
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飞牦9楼
2017-03-24 19:44   回复  
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^_^ 发自小木虫IOS客户端
2017-03-24 19:55   回复  
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蕾欧娜11楼
2017-03-24 20:10   回复  
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laozhu557312楼
2017-03-24 20:21   回复  
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2017-03-24 20:34   回复  
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祝福 发自小木虫IOS客户端
jufayin14楼
2017-03-24 20:44   回复  
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nono200915楼
2017-03-24 22:06   回复  
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gorgan17楼
2017-03-25 08:40   回复  
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祝福 [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
yanbodr25楼
2018-06-01 07:26   回复  
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