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yeruge

新虫 (小有名气)

[求助] 为什么诱导表达一直是包涵体? 已有4人参与

目的基因连接至pet28a,转化至大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,但是无论怎么优化诱导条件,蛋白都是以包涵体形式存在。应该怎么做才会得到可溶性蛋白呢?
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0115元元

新虫 (初入文坛)

★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-03-24 07:50:51
外源蛋白本身就容易表达成包涵体,可以做下疏水性预测,越疏水越易行成包涵体。可以尝试低温诱导,低转速,改变培养基条件,或者换gst吧

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7楼2017-03-22 23:34:13
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
变GST融合蛋白。。。。。。。连PGEX-4T-1
采菊东篱下,悠然见南山。
2楼2017-03-22 16:05:27
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新人求帮助

新虫 (初入文坛)

楼主你和我一样,我最近也是蛋白表达都是包涵体,也没有找到解决办法,如果你解决了的话我们可以探讨一下

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3楼2017-03-22 17:58:09
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15113546664

新虫 (初入文坛)

我能说一下么,老师讲的一个例子,她师妹的导师讨厌包涵体,但是给了她一个载体,让他做条件优化,大半年了,都是包涵体,然后发现,这个载体就是为包涵体表达而设计的,还有你这个载体的宿主匹配么。

发自小木虫Android客户端
5楼2017-03-22 22:56:15
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15113546664

新虫 (初入文坛)

建议你查一下这个载体,我觉得它就是为包涵体而设计的

发自小木虫Android客户端
6楼2017-03-22 22:58:34
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xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)

包涵体可以复性,别折腾了,根据你的实验目的考量

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8楼2017-03-23 09:23:38
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547star

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
换成lac启动子或lacUV5启动子看看,或者融合可溶性蛋白表达看看。
为什么
9楼2017-03-24 00:13:25
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左岸默然

新虫 (初入文坛)

28a是包涵体载体呀,所以没用的,优化也还有

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10楼2017-03-25 14:14:25
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yeruge

新虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 左岸默然 at 2017-03-25 14:14:25
28a是包涵体载体呀,所以没用的,优化也还有

不是这样的 ,28a我也表达出可溶性蛋白啊
11楼2017-03-28 16:40:30
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普通回帖

寻找1

新虫 (正式写手)

4楼2017-03-22 22:31:38
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