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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » Hplc测定
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竹林之秋

新虫 (初入文坛)

[求助] Hplc测定 已有2人参与

请问在测定样品时，峰为什么会拖尾这么严重，怎么改善

Hplc测定


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1楼 2017-03-22 10:40:48
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胶原蛋白886

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1.色谱柱污染、如果色谱柱开始使用时峰形正常，使用一段时间后逐渐出现峰拖尾，则色谱柱被污染的可能性很大，可以冲洗一下柱子，或者换一根尝试下。
2.样品过载。进样量太多，减少进样体积。
3.大峰后面有小峰出现，可以用PDA检测器检测一下样品纯度。
4.流动相PH值。流动相的pH 在样品的pKa附近时，样品解离平衡不充分，容易出现前伸峰或拖尾峰，pＨ应尽量选在样品pＫa±１.5以外 。
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竹林之秋
2楼2017-03-22 11:08:28
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chjm1016

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
峰型不算特别差，可以尝试将洗脱梯度的上升速率提高，能使峰型更尖锐一些，加大淋洗液流量也有所帮助。
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竹林之秋
3楼2017-03-22 12:31:23
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竹林之秋

新虫 (初入文坛)
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引用回帖:
2楼: Originally posted by 胶原蛋白886 at 2017-03-22 11:08:28
1.色谱柱污染、如果色谱柱开始使用时峰形正常，使用一段时间后逐渐出现峰拖尾，则色谱柱被污染的可能性很大，可以冲洗一下柱子，或者换一根尝试下。
2.样品过载。进样量太多，减少进样体积。
3.大峰后面有小峰出现 ...

超级感谢您的帮助

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4楼2017-03-22 19:38:58
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竹林之秋

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by chjm1016 at 2017-03-22 12:31:23
峰型不算特别差，可以尝试将洗脱梯度的上升速率提高，能使峰型更尖锐一些，加大淋洗液流量也有所帮助。

这个峰，要是不调拖尾，能不能用啊？

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5楼2017-03-22 19:39:41
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竹林之秋

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by chjm1016 at 2017-03-22 12:31:23
峰型不算特别差，可以尝试将洗脱梯度的上升速率提高，能使峰型更尖锐一些，加大淋洗液流量也有所帮助。

您说的梯度洗脱的上升速率提高是怎么操作的呢？我的样品是单组分物质，需要梯度洗脱吗?

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6楼2017-03-22 19:58:26
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chjm1016

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

能梯度洗脱当然用梯度洗脱更好，一般是有机相比例逐渐升高，程序的最后让有机相比例快速回到起始比例。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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7楼2017-03-22 22:38:21
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