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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » SDS-PAGE三层胶电泳样品弥散严重
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烟袋斜街

新虫 (初入文坛)

[求助] SDS-PAGE三层胶电泳样品弥散严重 已有3人参与

最近跑的小分子蛋白电泳，采用三层胶分离，结果不理想。有几个问题想求教，
           1  三层胶中夹层胶的作用。
           2  点样时样品沉降速度慢，有的停留在孔的中间而且还有点往其它孔里漂的现象，求解决办法
           3  Marker停留在夹层胶中有影响吗？
      求大神帮助，谢谢！
SDS-PAGE三层胶电泳样品弥散严重


SDS-PAGE三层胶电泳样品弥散严重-1
IMG_20170320_190602.jpg@hc-material@gyesang
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1楼 2017-03-21 16:18:07
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
是不是有粘稠感？
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2楼2017-03-22 11:28:41
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十四_14

荣誉版主 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1、我觉得夹层胶作用有点类似于浓缩胶；有的人使用的方法中也有不配夹层胶的；
2、这是样品本身的问题，但我不知道你的样品是什么，你可以试试loading buffer中甘油含量增大一点，便于样品沉降；
3、marker留在夹层胶中没问题，我的样品中一些比较大的条带也会留在夹层胶里，不影响你要的结果就行
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3楼2017-03-22 15:00:39
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xuweitao

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
样品太浓，稀释十倍上样。
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4楼2017-03-22 20:33:23
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烟袋斜街

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 十四_14 at 2017-03-22 15:00:39
1、我觉得夹层胶作用有点类似于浓缩胶；有的人使用的方法中也有不配夹层胶的；
2、这是样品本身的问题，但我不知道你的样品是什么，你可以试试loading buffer中甘油含量增大一点，便于样品沉降；
3、marker留在夹 ...

前面样品沉降的问题加了甘油之后解决了，谢谢大神。还想问一下我的marker为什么会被带歪？还有最下面的紫色弥散的地方算是有蛋白吗？

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5楼2017-03-25 19:58:26
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烟袋斜街

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by xuweitao at 2017-03-22 20:33:23
样品太浓，稀释十倍上样。

样品浓度本来就很低

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6楼2017-03-25 19:58:49
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eggplant1993

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 烟袋斜街 at 2017-03-25 19:58:49
样品浓度本来就很低
...

跑出来条带很粗，感觉样品太浓了，把Marker挤歪了
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7楼2017-03-27 10:35:01
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