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柠檬可乐星

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[求助] 求大神指导这个PCR程序是如何设置的已有2人参与

如题，最近读的一篇文献里我的目的片段扩增程序是这样的：SSU rDNA was amplified by PCR in a total volume of 50ul. The thermal cycle parameters consisted of 40 cycles of 30 s at 94℃, 30 s at 50℃ and 120 s at 72℃, followed by 5 min at 72℃ for final extension. Partial SSU rDNA sequences were obtained by amplification with the primer pairs s14F3-s17 and s14F3-sB (primers described in Pawlowski, 2000). The obtained PCR products were used for reamplification with the primer pairs s14F1–s17 and s14F1–sB, using the same thermal cycle parameters during 25 cycles.

引物位置如下图

那么问题来了，在 amplification 的时候，s14F3-s17 and s14F3-sB （同理， s14F1–s17 and s14F1–sB）这两对引物是同时加到50ul的PCR体系里吗？

之前没见过这种写法的，实在搞不明白这个PCR程序是怎么设置的，还请各位大神指导一二，多谢！！！

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越努力越幸运

1楼2017-03-20 15:38:47

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引用回帖:

10楼: Originally posted by 六行911 at 2017-03-21 17:42:08
我觉得应该和8楼所说一样，用第一次的扩增产物当第二次的模板，这样可以起到放大的作用类似巢式pcr的作用，你可以先分管做，再合管做，可能是针对你的模板只能特异性的扩增出其中一个片段，后面加入巢式再去做放大片 ...

其实您说的这些我都知道了，现在我不确定的问题是：第一次40个循环的PCR，是把s14F3-s17 和s14F3-sB这两对引物一次性同时加入同一个PCR体系里面吗？