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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » TAKARA T4 DNA Ligase使用
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雪糕哦

新虫 (著名写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by huxi_8 at 2017-03-18 01:47:48
5311  片段质粒buffer酶，每次都成！

嗯，谢谢，如果这次不成我试试

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11楼2017-03-18 20:18:44
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雪糕哦

新虫 (著名写手)
送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by 都从新来过 at 2017-03-18 00:11:09
水1  我们的比例一般在1比3和1比6之间    当然不排除有的基因确实不好连

感谢回答。这次用的载体基因1:3，不知道能不能连上。

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12楼2017-03-18 20:20:09
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雪糕哦

新虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 都从新来过 at 2017-03-18 00:09:03
28a是低拷贝 首先说下体系载体1.5  基因6  10??buffer 1  水0.5 酶0.5       16度水浴4到6hr

我一直都是16度水浴过夜啊。

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13楼2017-03-18 20:20:32
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都从新来过

新虫 (初入文坛)
过夜一般是冰箱4度

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14楼2017-03-19 00:47:15
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雪糕哦

新虫 (著名写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 都从新来过 at 2017-03-19 00:47:15
过夜一般是冰箱4度

你用的是TAKARA T4 DNA LIGASE 2011A吗？我看说明书上要求16度过夜啊

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15楼2017-03-19 16:09:39
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雪糕哦

新虫 (著名写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by huxi_8 at 2017-03-18 01:47:48
5311  片段质粒buffer酶，每次都成！

你用的是TAKARA T4 DNA LIGASE吗？10倍的buffer？

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16楼2017-03-19 16:59:07
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小小风信子

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
先片段和质粒酶切回收后各跑一微升电泳看看 片段多大？
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一座冷落的殿堂终归是庙，一尊推倒的圣像依然是神。
17楼2017-03-19 19:58:26
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方天翼614

新虫 (小有名气)
各位战友，我最近也在做目的片段TA克隆后双酶切再与双酶切后的pet28a连接，涂板挑单克隆，菌液pcr出问题了:用自己的目的基因片段的引物跑胶条带非常亮（预想一样）然而用载体通用引物T7和我的目的基因下游引物R跑胶则什么也没有？求指点！非常感谢

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18楼2017-06-20 23:12:03
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green静

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 十四_14 at 2017-03-17 15:41:16
连接时比较关键的是载体和目的片段的比例  连接酶的话0.5微升就可以
所以我觉得连不上应该不是连接酶的问题

你好，用量怎么算呀

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19楼2017-11-27 15:15:02
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