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雪糕哦

新虫 (著名写手)

[求助] TAKARA T4 DNA Ligase使用已有1人参与

TAKARA T4 DNA Ligase使用问题:PET28a和基因连接,T4 DNA Ligase和Buffer用量多少呢?
   10微升体系:载体1,基因6,连接酶1,buffer1,水1和载体1,基因6,连接酶0.5,buffer1,水1.5。两都试过了,连不上。
   求大神解答。

TAKARA T4 DNA Ligase使用


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雪糕哦

新虫 (著名写手)

送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by 都从新来过 at 2017-03-18 00:11:09
水1  我们的比例一般在1比3和1比6之间    当然不排除有的基因确实不好连

感谢回答。这次用的载体基因1:3,不知道能不能连上。

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12楼2017-03-18 20:20:09
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十四_14

荣誉版主 (正式写手)

连接时比较关键的是载体和目的片段的比例  连接酶的话0.5微升就可以
所以我觉得连不上应该不是连接酶的问题

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2017-03-17 15:41:16
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雪糕哦

新虫 (著名写手)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 十四_14 at 2017-03-17 15:41:16
连接时比较关键的是载体和目的片段的比例  连接酶的话0.5微升就可以
所以我觉得连不上应该不是连接酶的问题

感谢回答。之前做得载体和基因比例都是1:6,今天再做一次1:3的,看看能不能连上。

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3楼2017-03-17 15:50:48
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jcstone1027

铁杆木虫 (正式写手)

木虫

我们最近也在做连接,我们的体系是25微升,我觉得载体根据浓度还是尽量少加点,我们也一直连接效率非常低,阳性克隆非常少,你需要验证下是不是连接酶是不是有问题。

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学习,交流
4楼2017-03-17 22:39:21
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